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| TaKaRa LA Taq™ |
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使用LA PCR用Genome DNA Set的LA PCR
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| 利用LA PCR用Genome DNA Set中的各DNA和相应的Primer set，使用TaKaRa LA Taq进行了PCR扩增 |
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| ■ 配制PCR反应液 |
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使用量 |
终浓度 |
| genome DNA |
1 μl |
人 genome：500 ng
E.coli genome：100 ng
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| 10×LA PCR Buffer II (Mg2+ free) |
5 μl |
×1 |
| 25 mM MgCl2 |
5 μl |
2.5 mM |
| dNTP Mixture |
8 μl |
400 μM each |
| Primer #1 |
1 μl |
0.2 μM |
| Primer #2 |
1 μl |
0.2 μM |
| TaKaRa LA Taq |
0.5 μl |
2.5 U/50 μl |
| 灭菌水 |
up to 50 μl |
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| ■ 操作时的注意事项 |
| · 试剂盒中的试剂在室温～37℃下完全融解后，充分吸打混合或上下颠倒混合。避免振荡混合。10×LA PCR Buffer、TaKaRa LA Taq吸打混合时要注意防止气泡产生及酶的失活。此外，试剂使用前在冰上保存。 |
| · 配制的反应液在反应前轻轻吸打混合。绝对不能振荡混合。 |
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| ■ PCR反应条件【使用TaKaRa PCR Thermal Cycler MP】 |
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| 94℃、1 min |
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1 cycles |
| 98℃、10 sec |
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30 cycles |
| 68℃、15 min |
| 72℃、10 min |
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1 cycles |
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| Lane 1： |
λ-Hind III digest |
| Lane 2： |
人基因组DNA的扩增产物 8 μl（扩增片段大小：17.5 kbp） |
| Lane 3： |
E.coli基因组DNA的扩增产物 4 μl（扩增片段大小：20 kbp） |
| Lane 4： |
λ-Hind III digest |
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| 0.6% SeaKem Gold Agarose gel |
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