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| TaKaRa LA Taq™ |
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| 易形成二级结构DNA片段的扩增例 |
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| 同GC Rich DNA片段相同，易形成二级结构的模板使用以往的Taq酶也难以进行PCR扩增。 |
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| 下面是以易形成二级结构的DNA片段为模板，扩增片段大小为2.7kbp的扩增例。从图1可以看出，使用以往的Taq酶有非特异性扩增产物，而使用TaKaRa LA Taq （LA PCR Buffer II）可进行良好的扩增。 |
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| 没有PCR扩增产物时，一般需进行PCR条件研讨及重新设计引物等，而使用高扩增效率的TaKaRa LA Taq （LA PCR Buffer II）即可改善PCR扩增反应。强烈建议使用本酶。 |
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| Template： |
易形成二级结构的cDNA |
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(用EcoR I酶切后插入到pBluescript II的cDNA) |
| 扩增片段大小： |
约 2.7 kbp |
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（大小为3kbp的GC Rich DNA片段用Hindd III酶切后插入到pUC118中） |
| Primer： |
Custom long primer (30～32 mer)(各10 pmol/50 μlPCR) |
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引物序列与GC Rich DNA 片段的扩增例实验使用的引物相同。 |
| dNTP Mixture： |
以7-deaza-dGTP替代dGTP |
| PCR条件： |
94℃、1 min |
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↓ |
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98℃、20 sec |
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30 cycles |
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68℃、3 min |
| (使用TaKaRa PCR Thermal Cycler 480) |
| ※ DNA样品由庆应大学·分子生物学讲座的高柳先生提供。 |
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1% Agarose gel |
| 8 μl电泳 |
| Lane 1： |
Taq |
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进行PCR扩增 |
| Lane 2： |
TaKaRa Ex Taq |
| Lane 3： |
TaKaRa LA PCR Kit Ver. 2 |
| M： |
λ-Hind III digest |
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| 图1 易形成二级结构DNA片段的扩增比较 |
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