Takara



TaKaRa LA Taq^™


GC rich片段的扩增例



模板DNA为GC Rich序列时，使用以往的Taq DNA Polymerase通常难以进行PCR扩增。TaKaRa LA Taq和TaKaRa Ex Taq同以往的Taq DNA Polymerase相比，扩增效率高，可对一般难以扩增的DNA片段进行PCR扩增。

下面是GC含量为70%的DNA片段大小为3kbp的扩增例。

图1对使用普通Taq DNA Polymerase和TaKaRa Ex Taq、TaKaRa LA PCR Kit Ver. 2的PCR扩增进行了比较。结果显示普通Taq酶不能扩增的GC Rich DNA片段使用TaKaRa Ex Taq、TaKaRa LA PCR Kit Ver. 2可进行良好的PCR扩增。

GC Rich DNA片段进行PCR扩增时，以7-deaza-dGTP替代dGTP有时可获得良好的扩增结果。如果想提高扩增效率，将dGTP和7-deaza-dGTP（或dTTP）混合后再使用可获得更好的扩增结果（图2）。根据扩增片段的种类可优化dGTP和7-deaza-dGTP（或dTTP）的混合比例，建议进行各种条件的研讨决定最佳混合比例。

* Primer序列
M3-30 (将M3 Primer延长的DNA序列)
5'-CAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGT-3'
RV-32 (将RV Primer延长的DNA序列)
5'-GATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGAC-3'

Template：	VIII-5-pUC118
	（大小为3kbp的GC Rich DNA片段用Hindd III酶切后插入到pUC118中）
扩增片段大小：	约 3 kbp
	（大小为3kbp的GC Rich DNA片段用Hindd III酶切后插入到pUC118中）
Template：	VIII-5-pUC118
Primer：	Custom long primer (30～32 mer)
	(各10 pmol/50 μl PCR)
dNTP Mixture：	以GTP替代7-deaza-dGTP
PCR条件：	94℃、1 min		30 cycles
	68℃、5 min
(使用TaKaRa PCR Thermal Cycler 480)


	1% Agarose gel
	8 μl电泳
	Lane 1：	Taq		进行PCR扩增
	Lane 2：	TaKaRa Ex Taq
	Lane 3：	TaKaRa LA PCR Kit Ver. 2
	Lane M1：	λ-Hind III digest
	Lane M2：	λ-EcoT14 I digest
图1比较GC Rich DNA片段的PCR扩增


	1% Agarose gel
	10 μl电泳
	Lane 1：	dGTP：dITP = 3：1		使用TaKaRa LA PCR Kit Ver. 2进行PCR扩增
	Lane 2：	dGTP：7-deaza-dGTP = 3：1
	Lane 3：	7-deaza-dGTP
	Lane 4：	dGTP：dITP = 3：1		使用TaKaRa Ex Taq 进行PCR扩增
	Lane 5：	dGTP：7-deaza-dGTP = 3：1
	Lane 6：	7-deaza-dGTP
	Lane M：	pHY Marker
图2 dGTP和7-deaza-dGTP、dITP的混合比例与GC rich DNA扩增片段的比较