Takara

TaKaRa LA Taq^™

以人基因组DNA作为模板进行LA PCR

模板DNA：

人基因组DNA

Target：

β-globin cluster region和TPA gene region

扩增片段：

17.5 kb　β-globin cluster region

21.5 kb　β-globin cluster region

27 kb　　TPA gene region

■ 反应液组成

	反应液加量	终浓度
人基因组DNA (500 ng/μl)	1 μl	500 ng/50 μl
10 × LA PCR Buffer II (Mg²⁺ plus)	5 μl	［1×］
dNTP Mixture	8 μl	各 400 μM each
Sense Primer (20 pmol/μl)	0.5 μl	0.2 μM
Antisense Primer (20 pmol/μl)	0.5 μl	0.2 μM
TaKaRa LA Taq	0.5 μl	2.5 U/50 μl
灭菌蒸馏水	34.5 μl
Total	50 μl

·上层添加50μl矿物油

■ PCR条件【使用TaKaRa PCR Thermal Cycler TP480】

94℃	1 min
↓
98℃	20 sec		14 cycles
68℃	20 min		14 cycles
↓
98℃	20 sec		16 cycles
68℃	20 min + 15 sec/cycle		16 cycles
↓
72℃	10 min

■ 结果

各5 μl/电泳

0.4% Agarose gel

Lane 1：

λ-Hindd III digest

Lane 2：

17.5 kb

Lane 3：

21.5 kb

Lane 4：

27 kb

Lane 5：

High Molecular Weight DNA Markers (BRL)