Takara



TaKaRa LA Taq^® with GC Buffer


Cool Start^™法


这种冷启动法（Cool Start Method）可增强PCR扩增的特异性，减少PCR过程中的非特异性反应，能得到良好的PCR结果。该方法操作简单，无需专门的酶或附加试剂。

■ Cool Start法操作过程
1、使用前将试剂置于冰上。
2、在冰上准备反应混合液^1，2。 1：添加顺序不影响结果。 *2：开始前在冰上放置30 min不会影响结果。
3、设定程序^3。 3：Cool Start法不需要改变PCR条件。
4、将tube放入后立即开始。

■ Cool Start法和Hot Start法的比较
对Cool Start法和Hot Start法进行了比较。并对A公司推荐的Hot Start专用rTaq的使用方法也进行了比较。
从图1可以看出，使用比Hot Start法更简便的Cool Start法和TaKaRa Ex Taq可实现更高的扩增效率和保真性。

图1 Cool Start法进行PCR比较


PCR反应条件
【使用TaKaRa Thermal Cycler480】
94℃、1 min 60℃、1 min 40 cycles ↓　60℃、10 min 3% NuSieve 3：1 agarose 各8 μl电泳
模板：	HIV-1 positive control DNA和人基因组DNA的混合物
Lane M ：	φX174-Hinc IIdigest
Lane 1, 4 ：	室温配制
Lane 2, 5 ：	使用AmpliWax的Hot Start法
Lane 3 ：	室温配制 + 95℃、9 min pre-incuvation (A公司推荐的标准操作流程)
Lane 6 ：	Cool Start法