Takara



TaKaRa Taq^™

TaKaRa Taq中E.coli基因组DNA的污染检测


目前，市场上销售的Taq DNA Polymerase几乎均是经过克隆转化到E.coli中进行表达后，分离提取得到的，那么就可能存在E.coli基因组DNA导致的内源性污染。实验中使用E.coli来源的DNA混入量最低的高品质的Taq DNA Polymerase尤为重要。
下面是为了检测TaKaRa Taq和其他公司的Taq DNA Polymerase（标准级别）的E.coli基因组DNA污染，针对ori区域进行了巢式PCR扩增例。
从图2结果来看，TaKaRa Taq中没有E.coli基因组DNA的扩增片段，但其他公司的Taq DNA Polymerase（标准级别）有ori区域（143 bp）的扩增片段。通过泳道9的扩增结果也可以证明Taq DNA Polymerase（标准级别）中有E.coli的基因组DNA的扩增。
从以下结果看出，TaKaRa Taq中的E.coli基因组DNA量很少，在巢式PCR扩增检测界限1-10 fg以下，证明TaKaRa Taq的品质高于其他公司标准级别的Taq DNA Polymerase。


*图1：E. coli基因组的Ori区域和引物设计*




图2：2nd PCR反应的结果

Lane	Template量
Lane 1 ：	0	negative test
Lane 2 ：	0
Lane 3 ：	0
Lane 4 ：	0
Lane 5 ：	0
Lane 6 ：	1 pg	positive control
Lane 7 ：	100 fg
Lane 8 ：	10 fg
Lane 9 ：	1 fg

扩增区域：	E. coli. ori region
目的片段大小：	2nd PCR 143bp
M：	pHY Marker（Code No. 3404A/B）各8 μl电泳
泳道6-9作为阳性对照，在1st PCR时分别加入1 pg、100 fg、10 fg 、1 fg E. coli JM109基因组DNA后进行了巢式PCR。