TaKaRa LA Taq® with GC Buffer

Cool Start
 
   这种冷启动法(Cool Start Method)可增强PCR扩增的特异性,减少PCR过程中的非特异性反应,能得到良好的PCR结果。该方法操作简单,无需专门的酶或附加试剂。
 
   ■ Cool Start法操作过程
       1、 使用前将试剂置于冰上。
       2、 在冰上准备反应混合液*1,2
           *1:添加顺序不影响结果。
           *2:开始前在冰上放置30 min不会影响结果。
       3、 设定程序*3
           *3:Cool Start法不需要改变PCR条件。
       4、 将tube放入后立即开始。
 
   ■ Cool Start法和Hot Start法的比较
       对Cool Start法和Hot Start法进行了比较。并对A公司推荐的Hot Start专用rTaq的使用方法也进行了比较。
       从图1可以看出,使用比Hot Start法更简便的Cool Start法和TaKaRa Ex Taq可实现更高的扩增效率和保真性。
 
       图1 Cool Start法进行PCR比较
 
   PCR反应条件
   【使用TaKaRa Thermal Cycler480】
             94℃、1 min
             60℃、1 min   40 cycles
             ↓ 60℃、10 min
             3% NuSieve 3:1 agarose
             各8 μl电泳
   模板: HIV-1 positive control DNA和人基因组DNA的混合物
   Lane M : φX174-Hinc IIdigest
   Lane 1, 4 : 室温配制
   Lane 2, 5 : 使用AmpliWax的Hot Start法
   Lane 3 : 室温配制 + 95℃、9 min pre-incuvation (A公司推荐的标准操作流程)
   Lane 6 : Cool Start法