Takara

PrimeScript^™ RT reagent Kit (Perfect Real Time)

反转录反应时间和cDNA合成量的研讨实验

1. 反转录反应

试剂：	PrimeScript RT reagent Kit（Perfect Real Time）
模板：	Mouse Liver Total RNA （2 pg-2 μg和灭菌水）
反应体积：	20 μl
RT-Primer：	Random 6 mers
反应条件：	37℃ 15、30、60 min反应后85℃ 5 sec，4℃保存

2. Real Time PCR反应

试剂：	TB Green Premix Ex Taq （Perfect Real Time）
模板：	上述反转录反应液2 μl
反应体积：	25 μl
Target Gene：	Actb
反应条件：	Thermal Cycler Dice Real Time System 标准反应条件

3. Real Time PCR反应结果

Real Time PCR扩增曲线图及标准曲线图如下：

15 min （紫色）
30 min （红色）
60 min （茶色）

扩增曲线图

标准曲线图

15 min（紫色） Rsq: 0.999 Eff＝92.3％ Y＝-3.522LOG（X）+33.94

30 min（红色） Rsq: 0.999 Eff＝93.3％ Y＝-3.495LOG（X）+34.61

60 min（茶色） Rsq: 0.999 Eff＝95.2％ Y＝-3.441LOG（X）+34.28

以上Real Time RT-PCR扩增结果显示，不同反转录反应时间（15、30、60 min）在宽广模板量范围内都可以得到同等的扩增效率。