Takara

PrimeScript^™ RT Master Mix (Perfect Real Time)

反转录反应时间和cDNA合成量的研讨实验

[方法]

1. 反转录反应

试剂：	PrimeScript RT Master Mix（Perfect Real Time）
模板：	Human Placenta Total RNA 2 pg-2 μg
反应体积：	20 μl
反应条件：	37℃ 15、30、60 min反应后85℃ 5 sec热变性，4℃保存

2. Real Time PCR反应

试剂：	TB Green Premix Ex Taq II（Perfect Real Time）
模板：	上述反转录反应液2 μl
反应体积：	25 μl
Target Gene：	ACTB
反应条件：	Thermal Cycler Dice Real Time System 标准反应条件

[结果]

Real Time PCR扩增曲线图及标准曲线图如下：

15 min （紫色）
30 min （红色）
60 min （黄色）

扩增曲线图

标准曲线图

15 min（紫色） Rsq: 0.999 Eff＝99％ Y＝-3.346LOG（X）+34.52

30 min（红色） Rsq: 1.000 Eff＝98.9％ Y＝-3.349LOG（X）+34.46

60 min（黄色） Rsq: 0.999 Eff＝100.9％ Y＝-3.301LOG（X）+34.24

以上Real Time RT-PCR扩增结果显示，不同反转录反应时间（15、30、60 min）在宽广模板浓度范围内都可以得到同等的扩增效率。