提取的total RNA量少，可以从以下几个方面考虑：
· 使用的酵母菌体量过多。
使用多于2～5×107（使用Saccharomyces cerevisiae时）的酵母菌体时，Yeast Processing Enzyme Solution中含有的酶不能充分分解细胞壁，从而造成total RNA的提取量低。请使用适宜的酵母菌体量。依酵母（属）不同能够处理的适宜菌体数会有不同，此时请预先确认适宜处理的菌体数量。
· 使用的酵母菌体量过少。
使用明显少于2～5×107（使用Saccharomyces cerevisiae时）的酵母菌体提取total RNA时，total RNA的收量和纯度会降低。为了能够以稳定的回收率回收total RNA，请使用上述记录的菌体量相近的菌体提取total RNA。依酵母（属）不同能够处理的适宜菌体数会有不同，此时请预先确认适宜处理的菌体数量。
· 所使用的酵母菌不适合使用该制品提取total RNA。
本制品使用Yeast Processing Enzyme Solution中含有的酶分解酵母细胞壁。因此，如果将该制品用于难于分解细胞壁的酵母菌时，total RNA的提取量会显著降低。
· total RNA的溶解不充分。
使用RNAiso Plus提取total RNA时，75％乙醇清洗后，如果过度干燥会使溶解变得困难。因此请注意不要加热干燥或长时间干燥。溶解困难时，可在60℃加热5分钟后于冰上放置数小时溶解。
· 依据使用的酵母（属）或培养条件，使用样品的状态（处于对数生长期的新鲜酵母菌体、长时间培养的酵母菌体、冷冻保存的酵母菌体pellet等）不同前处理的适宜时间不同。此时需要预先优化处理时间。
· 以冷冻保存的酵母菌体pellet为样品进行提取时，由于冷冻状态和保存时间不同，可能对total RNA的质量及纯度产生影响。此时，请准备处于对数生长期的新鲜酵母菌体，不推荐长期冷冻保存的菌体。
使用NucleoSpin RNA提取total RNA时，必须使用NucleoSpin RNA中添加Reaction Buffer for rDNase 和Reconstituted rDNase＊在Column上进行DNase I处理。（＊参照NucleoSpin RNA的说明书进行操作。）但是，即使是在Column上进行DNase I 处理，由于被处理的酵母（属）或培养条件，或被处理的酵母菌体是否过量及水相回收的情况等不同，可能依然会有基因组DNA混入。此种情况，请根据需要进行DNase I处理，操作方法请参照说明书中Appendix内容。
页面更新：2019-04-26 16:24:29
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