基因组DNA收量较低时,可以从以下几个方面考虑:
1. 实验材料量太少,适当增加材料起始量;
2. 裂解不充分,DNA未充分释放,建议要延长裂解时间(过夜裂解)或增加裂解液的量;
3. 样品质量不理想,提取的组织材料中基因组DNA含量较少,适当增加起始组织量;
4. 起始组织量过大,裂解困难,按比例适当增加裂解液的加量或分成多份进行提取;
5. 洗脱时将灭菌水或Elution Buffer加热至65℃后使用将有利于提高洗脱效率;
6. 请严格按照操作方法进行操作。
本试剂所提取DNA的完整性依赖于样本类型、储存时间以及固定条件。如果甲醛固定时间过长或样本保存时间过久(>1年),可能会导致DNA完整性受损,如果目的片段较长时PCR扩增困难。
1. 实验过程中没有使用RNase A。应严格按照实验操作要求使用RNase A。
2. RNase A可能失活。RNase A尽可能在-20℃下保存,RNase A活性比较稳定,一般不易失活。
1. 提取的基因组DNA中盐份浓度过高。在使用Buffer WA和Buffer WB进行DNA制备膜的清洗时,请沿Spin Column的管壁四周加入,且加入Buffer WB后室温静置5分钟,有助于彻底清洗掉Column上残留的盐离子,这样有利于提高清洗效果。
2. 洗脱液中残留乙醇,在向Column中加入洗脱液之前,将Column在室温下静置2分钟有助于使Column上残留的乙醇彻底挥发,然后再加入洗脱液洗脱。
3. 进行DNA洗脱时请一定在膜的中央加入洗脱液,尽量不要沾染Spin Column的管壁四周。
本试剂盒主要用于小量基因组DNA的制备,当实验材料量超出说明书的要求用量时,可以加大Buffer GL或Buffer GB的用量,裂解后分到两个Collection Tube中进行实验操作。起始组织量最好控制在规定范围内,可以分几份进行,否则起始量过大会影响裂解和收量,如果裂解不充分会堵塞柱子,造成实验失败。
页面更新:2019-04-25 14:05:49