本试剂盒可从新鲜的全血或冻存的全血(全血起始量不超过1 ml)中提取基因组DNA。从新鲜的全血材料中提取得到的DNA量较多,如从1 ml马全血中提取获得5 μg基因组DNA;从1 ml猪全血中提取获得10 μg基因组DNA;从1 ml人全血中提取获得5 μg基因组DNA;从5 μl的鱼全血,纯化得到了约12 μg的基因组DNA。但若使用冻存的、反复冻融的或长时间保存的全血材料,DNA的收量将明显减少。
基因组DNA收量较低时,可以从以下几个方面考虑:
1. 洗脱时将Elution Buffer或灭菌水加热至65℃后使用将有利于提高洗脱效率;
2. 起始全血量较低或全血不够新鲜(避免反复冻融),DNA已经降解;
3. 请严格按照操作方法进行操作。
1. 血液样品不够新鲜,已加入抗凝剂的血液样品可在2~8℃保存10天;
2. 加入Buffer RCL后,放置太长时间会导致提取的基因组DNA降解,应严格按照实验步骤操作。
3. 红细胞裂解不充分,若加入Buffer RCL裂解红细胞后,离心收集的沉淀中仍残留明显的红色沉淀,应重复使用Buffer RCL进行裂解。
1. 实验过程中没有使用RNase A。应严格按照实验操作要求使用RNase A。
2. RNase A可能失活。RNase A尽可能在-20℃下保存。
1. 提取的基因组DNA中盐份浓度过高。在使用Buffer WA和Buffer WB进行DNA制备膜的清时,请沿Spin Column的管壁四周加入,且加入Buffer WB后室温静置5分钟,有助于彻底清洗掉Spin Column上残留的盐离子,这样有利于提高清洗效果。
2. 洗脱液中残留乙醇,在向Spin Column中加入洗脱液之前,将Spin Column在室温下静置2分钟有助于使Spin Column上残留的乙醇彻底挥发,然后再加入洗脱液洗脱。
3. 进行DNA洗脱时请一定在膜的中央加入洗脱液,尽量不要沾染Spin Column的管壁四周。
全血经过冻存后会使大部分的红细胞和部分白细胞破裂。由于DNA主要存在于白细胞中,所以通常情况下冻存全血的DNA提取量会减少20%~50%。
页面更新:2019-04-25 11:13:38