可以。根据本公司的实验数据，以上三种PCR用DNA Polymerase的PCR扩增产物和TaKaRa Taq 一样，在DNA片段的3′端有一个附加的"A" 碱基 (A Overhang)，可以进行TA克隆。
TaKaRa Ex Taq 和TaKaRa LA Taq 都具有3′→5′的Exonuclease活性，但这种活性TaKaRa LA Taq 强于TaKaRa Ex Taq。因此，TaKaRa LA Taq 的可信度强于TaKaRa Ex Taq，因而适合于进行Long PCR。一般来说，在扩增数kbp的DNA片段时，从灵敏度、扩增量、PCR条件的通用性等方面综合考虑，使用TaKaRa Ex Taq 较佳；而扩增15 kbp以上的DNA片段时，使用TaKaRa LA Taq 更好。
PCR反应液请在冰中配制，然后置于PCR反应仪上进行PCR反应。这种冷启动法（Cool Start Method）与热启动法（Hot Start Method）相结合，更能有效地减少PCR过程中的非特异性反应，增强PCR扩增的特异性，能得到良好的PCR结果。
TaKaRa Ex Taq Hot Start是抗Taq单克隆抗体和TaKaRa Ex Taq的混合物，适用于Hot Start PCR。高温加热前，抗Taq单克隆抗体与TaKaRa Ex Taq酶结合，抑制聚合酶的活性，从而抑制低温条件下由引物的非特异性退火或引物二聚体引起的非特异性扩增。抗Taq单克隆抗体在PCR反应最初的DNA变性步骤已变性，因此无需特殊失活处理，在常规PCR反应条件下即可使用。如果模板二级结构复杂或者GC含量高时，一定要预变性的话，可以做94℃小于5 min的预变性处理。
TaKaRa LA Taq with GC Buffer的制品包装中添附有GC Buffer I 和GC Buffer II。其中GC Buffer II 的DNA变性效果强于GC Buffer I，因此，在实验时可先使用GC Buffer I，当使用GC Buffer I 不能进行PCR扩增时再使用GC Buffer II。
应注意使用Tm值较高的引物，因此，引物最好设计在30 mer以上。
TaKaRa公司曾经扩增过2 kb的GC含量在70%的DNA模板。同时也可应用于200 bp～300 bp的短链DNA GC rich模板。
TaKaRa公司曾用GC Buffer I 成功地扩增了人基因组DNA 17.5 kbp的DNA片段 (GC含量50%) 和λ DNA 35 kbp的DNA片段。但由于GC Buffer和一般的PCR用Buffer相比DNA变性效果较强 (特别是GC Buffer II)。因此，一般的DNA模板使用GC Buffer进行PCR扩增时，有时会降低PCR扩增效率。
不是，TaKaRa LA Taq 酶进行短片段DNA扩增时，其扩增性能仍然很好。 如果常规PCR难以进行扩增时，可以尝试使用TaKaRa Ex Taq 酶、TaKaRa LA Taq 酶等，有时会得到非常好的结果。
不可以。使用Pyrobest DNA Polymerase进行PCR扩增后的PCR产物3′端不附加 "A" 碱基，大部分为平滑末端。如果把使用本酶扩增的PCR产物克隆于去磷酸的平滑末端载体时，PCR产物必须进行5′末端磷酸化 (引物在合成时已进行5′末端磷酸化除外)。
根据TaKaRa公司的实验结果，Pyrobest DNA Polymerase的PCR扩增的可信度是通常的Taq DNA Polymerase的10倍。
根据TaKaRa公司的实验结果，使用Pyrobest DNA Polymerase成功地扩增了5 kb 的人染色体DNA片段和12 kb的λ DNA片段。
需要注意以下几个方面：
1．在配制反应液时，请在加入dNTP Mixture后加入Pyrobest DNA Polymerase。因为本酶的3’→5’活性较强，反应液中如果不含dNTP，引物有可能被分解。
2．使用Pyrobest DNA Polymerase扩增的DNA片段长度，会因模板DNA的种类及扩增的目的DNA片段的不同而各有差异。根据Takara公司的实验结果，使用Pyrobest DNA Polymerase成功地扩增了5 kb的人基因组DNA片段和12 kb的λ DNA片段。
3．PCR的反应液请在冰中配制，然后置于PCR反应仪上进行PCR反应。这种冷启动法（Cool Start Method）可增强PCR扩增的特异性，减少PCR过程中的非特异性反应，能得到良好的PCR结果。
需要优化以下几点：
a）延伸时间：延伸时间>1 min./kb。
b）退火时间：设定为15 sec.。
c）退火温度：以2℃为梯度降低退火温度。另外，选择3 step PCR。
d）模板DNA加量及纯度：使用适合的模板DNA加量；使用高度纯化的模板DNA。
e）引物浓度：在0.2～0.5 μM范围内调整引物终浓度。
需要优化以下几点：
a) 退火时间：设定为5 sec.。
b) 退火温度：以2℃为梯度升高退火温度。另外，选择2 step PCR。
c) 延伸时间：设定为1 min./kb。避免延伸时间过长。
d) 模板DNA：使用适合的模板DNA加量；避免使用过量的模板DNA。
e) 循环数：25-30 cycles。
f) 酶量：在推荐范围内减少酶量；PrimeSTAR HS加量最低为0.625 units/50 μl。
g) 引物浓度：0.2-0.3 μM (final conc.)范围内选择最适浓度。
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Taq Antibody的使用方法如下：
1．将Taq DNA Polymerase和Taq Antibody等体积混合（请务必使用本制品原液混合）后，20-25℃下放置约10 min即可使用。
2．然后可以按照各种PCR用DNA Polymerase的常规PCR反应条件进行PCR反应。实验确认，Taq Antibody与TaKaRa Taq（Code No. R001）、TaKaRa Ex Taq（Code No. RR001）、TaKaRa LA Taq（Code No. RR002）都可以配合使用，实验效果良好。
Pfu DNA聚合酶被广泛认为是一种高保真酶，但PrimeSTAR系列高保真酶能够提供比Pfu DNA聚合酶更好的保真度。在Takara Bio产品中，PrimeSTAR Max DNA聚合酶的保真度最高，当该酶用于扩增整个pUC119质粒时，序列分析检测到370656个碱基序列中仅有4个突变位点（错误率为0.0010%）。此外，与其他酶相比，PrimeSTAR Max DNA聚合酶扩增重复序列的保真度显著提高，与相似序列的模板交换速率（形成嵌合分子）低。
考虑以下PCR酶：
1. 首选：PrimeSTAR GXL DNA Polymerase 是Takara Bio产品中扩增富含GC模板最有效的酶，如细菌基因组DNA。它能够进行高保真扩增，错误率很低。PrimeSTAR GXL DNA聚合酶已被验证： 能够成功地在标准反应中利用该酶提供的缓冲液对GC含量约为70%的区域进行扩增。
2. 第二选择：对于含有高达90% GC含量的复杂模板，推荐使用Advantage GC 2 Polymerase Mix。该聚合酶适用于6 kb以下的片段的扩增。使用该试剂盒的DMSO和GC-Melt Reagent，通过标准PCR流程可扩增大部分富含GC的序列。
3. 第三选择：对于具有刚性结构、用PrimeSTAR GXL DNA聚合酶难以扩增的GC-rich目的序列，推荐使用TaKaRa LA Taq DNA Polymerase with GC Buffer。首先尝试GC buffer I，这种缓冲液有助于长链扩增。GC Buffer II对于具有复杂高级结构的模板是有效的，尽管这种缓冲液对于扩增短链更有效。
当扩增长度>6 kb并且需要高保真时，推荐使用PrimeSTAR GXL DNA Polymerase 。用该酶可以从人基因组DNA模板中扩增出30 kb的产物。TaKaRa LA Taq DNA polymerase 也可以用于长链PCR扩增，当扩增片段长度和扩增效率都是需要优先考虑的因素时，推荐使用该酶。
我们有多种可用于快速反应的PCR酶。
· 速度和保真度-PrimeSTAR Max DNA Polymerase采用特别开发的延伸因子，Priming效率高，延伸时间可低至5秒/kb，并且退火时间仅需5秒。该酶被推荐用于克隆和表达研究。
· 高通量应用和快速菌落PCR—SapphireAmp Fast PCR Master Mix是高通量应用的理想选择。该2X预混型制品包括高速DNA聚合酶、优化的缓冲液、dNTP混合物、凝胶染料（蓝色）和比重增加试剂。由于延伸时间只需要10秒/kb，高达1 kb的菌落PCR反应可在1小时内完成。
· SNP基因分型和快速长链PCR--SpeedSTAR HS DNA Polymerase 扩增效率高，可进行延伸时间为10-20秒/kb的PCR扩增。
TaKaRa Ex Taq DNA Polymerase 和 PrimeSTAR GXL DNA Polymerase对于扩增AT-rich的目标序列是有效的，例如含有内含子的基因组DNA或AT-rich的线粒体DNA。我们推荐PrimeSTAR GXL DNA聚合酶用于高保真扩增AT-rich的模板。与其他PCR酶相比，PrimeSTAR GXL DNA聚合酶可以使用标准PCR操作流程和提供的反应缓冲液，对AT含量>60％的目标序列进行扩增。
注意：PrimeSTAR GXL DNA聚合酶不能用于扩增亚硫酸氢盐处理的DNA或其他含尿嘧啶的模板。对于这个应用，请尝试使用TaKaRa EpiTaq HS (for bisulfite-treated DNA)。
有以下几种选择：
· TaKaRa EpiTaq HS (for bisulfite-treated DNA)是用于亚硫酸氢盐修饰后含有尿嘧啶的模板DNA进行PCR扩增的理想DNA聚合酶。本制品包含Hot Start抗体，适用于甲基化分析，包括COBRA和亚硫酸氢盐序列分析。
· EpiScope MSP Kit 是甲基化特异性PCR(MSP)分析的专用试剂。
· TaKaRa Taq DNA Polymerase 和TaKaRa Taq DNA Polymerase Hot Start Version这两种PCR酶都没有3'→5'外切酶活性，在某些情况下可以使用。
有以下几种选择：
TaKaRa Ex Taq DNA Polymerase扩增能力强，即使存在PCR抑制剂（如从植物组织粗提DNA中发现的多酚），也能表现卓越。当PCR反应需要保真性时，推荐使用PrimeSTAR GXL DNA Polymerase。虽然PrimeSTAR GXL聚合酶通常在标准操作流程下容易产生令人满意的结果，但如果存在非常高浓度的抑制剂，将酶浓度加倍可能才会改善结果。
或者，MightyAmp™ DNA Polymerase Ver.3可以从高含量PCR抑制剂的粗样品中直接扩增。它可以有效地扩增多种模板，包括GC-rich 和 AT-rich的模板。该酶也可用于直接从血液样品中进行PCR扩增。
如果这些酶都不能产生扩增产物，可能需要先纯化模板DNA。
我们推荐使用EmeraldAmp GT PCR Master Mix。该PCR master mix含有绿色染料和比重增加试剂，便于制备PCR反应混合物，并可直接上样于琼脂糖凝胶上进行PCR后的电泳。EmeraldAmp GT PCR Master Mix可以扩增长度高达10 kb，包括GC-rich 和 AT-rich的模板。此外，使用EmeraldAmp GT PCR Master Mix生成的PCR产物可以直接用于限制性内切酶消化、测序或TA克隆，无需纯化。
我们推荐SapphireAmp Fast PCR Master Mix用于菌落PCR。该预混酶可以耐受大量细菌核酸的存在。制品中已含有电泳时所必需的色素试剂 (迁移速度不同的两种蓝色色素)，PCR反应后可直接进行电泳。
MightyAmp系列、TaKaRa Taq DNA Polymerase 和TaKaRa Taq Hot Start Version 兼容含有次黄嘌呤的引物。
含有次黄嘌呤的引物不能与具有3'→5'外切酶活性的PCR酶搭配使用（例如PrimeSTAR HS DNA Polymerase, PrimeSTAR Max DNA Polymerase, PrimeSTAR GXL DNA Polymerase, TaKaRa Ex Taq DNA Polymerase, or TaKaRa LA Taq DNA polymerases。当使用其中一款适用的PCR酶做简并PCR时，我们建议在有需求的位置使用A、T、G或C混合的简并引物，而不是含有次黄嘌呤的引物。
想要获得高灵敏度检测，我们推荐使用Titanium Taq DNA Polymerase 或者TaKaRa Ex Taq DNA Polymerase 。这两种聚合酶已成功地应用于高灵敏度基因分型。
我们推荐使用MightyAmp™ DNA Polymerase Ver.3从粗提物或直接从组织中扩增靶位点。下面列出了直接PCR应使用的各种组织的推荐量：
· EDTA 抗凝血，肝素抗凝血 ≤10 μl
· 柠檬酸抗凝血≤5 μl
· 小鼠尾 ≤1 mm
· 小鼠耳 ≤1.5 mm2
· 小鼠脏器、脑 ≤1.5 mm3
· 植物叶片（西红柿、拟南芥、菠菜） ≤直径 2 mm
· 生体样品粗提液 ≤5 μl
我们推荐TaKaRa Taq DNA Polymerase 或 Titanium Taq DNA Polymerase 用于多重PCR。有关使用Titanium Taq DNA Polymerase进行高通量基因分型的多重PCR的更多信息，请参阅产品网页下方的tech note。
· PrimeSTAR系列PCR酶
这个系列的酶具有较强的3'→5'外切酶活性，扩增产物大部分都为平滑末端，不能直接进行TA克隆。PrimeSTAR系列DNA聚合酶的PCR产物进行TA克隆时，3’端必须添加“A”碱基。我们推荐使用Mighty TA-cloning Reagent Set for PrimeSTAR®，可简单地对PrimeSTAR系列DNA聚合酶的PCR产物3’端添加“A”碱基。A-overhang mixture与MightyTA-cloning Kit 配套使用，是PrimeSTAR系列DNA聚合酶PCR扩增产物的TA克隆专用试剂。
· Taq 和MightyAmp系列PCR酶
TaKaRa Taq, TaKaRa Ex Taq, TaKaRa LA Taq, SpeedSTAR HS, EmeraldAmp, SapphireAmp Fast, and MightyAmp系列PCR酶扩增得到的大部分PCR产物3’端附有一个“A” 碱基，因此可直接克隆于T-Vector中。也可以在末端平滑化和磷酸化后克隆到平滑末端载体。
· 所有Takara Bio DNA聚合酶
使用特定聚合酶扩增后的片段末端结构见下表。一些聚合酶产生平末端和A-overhang产物的混合物；另一些聚合酶仅产生平末端或A-overhang产物。
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页面更新：2020-04-23 14:00:41
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