我们推荐从新鲜的培养细胞中进行提取。但从本公司的实验结果看，进行3次冻融处理的培养细胞也能提取检出片断化DNA，但收量明显减少。
请将样品分装后在-20℃以下保存，尽量避免反复冻融。本公司的实验结果表明：-20℃至少1个月稳定；4℃保存时，至少7天稳定。
可以考虑以下原因：
1. 细胞凋亡进行过度，有非特异性的DNA片段。推荐提早取样时间。
2. 操作中混入DNase。应防止DNase混入（如实验戴手套等）。
可以考虑以下原因：
1. 没有发生细胞凋亡。可使用In situ Apoptosis Detection Kit（Code No. MK500）等确认细胞凋亡是否发生。
2. DNA量太少，无法检出。增加处理样品的细胞数或者尽可能使用少量的TE Buffer溶解提取样品DNA。
用细胞刮勺剥离较好，与使用Trypsin剥离细胞方法相比，前者剥离的细胞的片断化DNA Ladder较为清晰。
在40℃左右加热，即可溶解。溶解后的溶液可以正常使用，不影响实验结果。
正常使用，6×Loading Buffer没有问题。
适用于大部分培养细胞，也适用于其特性类似于培养细胞的细胞，比如使用BD Vacutainer® CPT (Becton Dickinson)从全血或者脾中提取的淋巴细胞。但本试剂盒不适用于组织。
细胞凋亡产生的DNA片断化受以下因素影响：靶细胞、诱导剂及其浓度和诱导的时间等。另外，最近有报道说产生了细胞凋亡也可能没有产生DNA片断化。该问题没有确切的答案。根据本公司的经验，推荐使用1 mM星型胞菌素（Sigma，Code No. S4400）处理的HL60细胞作为验证提取成功的对照。
<使用HL60细胞实验例>
在90 mm培养皿中，加入10 ml培养基，接种107个HL60细胞，然后加入星型胞菌素，使其终浓度为3 μM。在37℃、5％CO2条件下培养5小时*，全量离心回收细胞。
用PBS(-) Buffer清洗一次后，使其悬浮于少量的PBS(-) Buffer中，将5×106个细胞移入1.5 ml Microtube中，1,600×g室温离心5分钟。得到的片断化DNA最终用20 μl TE Buffer溶解。取其中5 μl用3％ Agarose Gel电泳检测。
*：细胞的不同培养状态下星型胞菌素的作用效果也不同。图1中的ladder是对星型胞菌素处理3～5小时得到的结果。
推荐使用3%的NuSieve® 3:1 Agarose (Lonza Rockland)。
页面更新：2020-05-11 15:55:22
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