一般情况下,Yeast Protein Extraction Reagent适用于所有对酵母菌破壁酶敏感的酵母菌细胞的Protein提取。我们使用本制品对Pichia(GS115、X33)、Saccharomyces(Y187、AH109)以及Candida(Tropicalis)进行了蛋白质的成功提取。下表是文献中报道的利用Yeast Protein Extraction Reagent能够成功裂解酵母菌细胞壁的菌种一览表。
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细胞数量太多会导致裂解液不能完全裂解细胞。如果初始加入的细胞过多会使反应液变得十分粘稠,而细胞则会聚集成团,使裂解作用不充分。在此种情况下可以将Yeast Protein Extraction Reagent的量加倍,以达到完全裂解的效果。
① 细胞未能完全裂解。一般来说,每25 μl的Yeast Protein Extraction Reagent可以对1~5×106的细胞进行裂解,得到约2.5 mg/ml的酵母菌蛋白质。如果加入的细胞数量过多,会造成蛋白质提取量下降。如果菌体量增加,请相应增加裂解用的Yeast Protein Extraction Reagent的使用量。
② 菌体不新鲜。提取用菌体的OD600值超过对数生长期会造成提取蛋白质的量和质发生变化,一般建议在酵母菌的对数生长期时收集菌体,进行蛋白质提取,此时效果较佳。
页面更新:2020-05-11 14:39:35