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机构用户解决方案

产品选择指南

技术服务信息

Q-1:提取的RNA中含有多糖怎么办?
A-1:

大多数的植物及动物肌肉组织中都含有大量多糖,因此很难将其从RNA中除去,使用此类组织材料提取RNA时,建议增加RNAiso Plus的使用量。
对于从含有大量多糖的植物样本中提取RNA时,推荐使用Fruit-mate for RNA Purification (Code No. 9192)作为预处理试剂。在异丙醇沉淀纯化步骤中加入High-Salt Solution for Precipitation (Plant) (Code No. 9193)可有效除去RNA溶液中的多糖。

Q-2:OD260/OD280<1.65,为什么?
A-2:

1. RNA应使用TE Buffer稀释后再进行吸光度值的测定,低离子强度或低pH值会使OD280值升高
2. 样品裂解时加入的RNAiso Plus量偏少,造成蛋白分离不充分,可以再次对RNA溶液进行处理,以除去蛋白。
3. 含有裂解液的样品经匀浆混匀后未在室温静置,或静置的时间不足5分钟。这一步是从核酸中分离核蛋白的重要步骤。
4. 相分离后,吸取上清液时不小心接触蛋白层造成污染。
5. RNA未充分溶解。

Q-3:如何计算RNA的浓度?
A-3:

RNA浓度=(OD260-OD320)×稀释倍数×0.04 μg/μl。

Q-4:提取的RNA不溶怎么办?
A-4:

提取的RNA不溶,有以下几点原因:
1.75%乙醇清洗沉淀后不要干燥时间过长或加热干燥。
2.可以于60℃加热5分钟后再于冰上溶解数小时。

Q-5:提取的RNA降解了,为什么?
A-5:

提取的RNA降解,有以下几点原因:
1.使用的组织材料不够新鲜。提取RNA的组织材料应采用新鲜的组织材料,或将新鲜组织材料用液氮迅速冷冻后置于-80℃保存。
2.提取RNA时使用的试剂及器材中混有RNA分解酶。
3.提取的组织材料中含有大量的RNA分解酶,而RNAiso Plus的添加量不够。

Q-6:提取的RNA中含有DNA污染,为什么?
A-6:

提取的RNA中含有DNA污染,有以下几点原因:
1.裂解组织或细胞使用的RNAiso Plus量偏少。
2.使用的组织材料中含有大量的有机溶剂(如:乙醇、异丙醇等)、高浓度的Buffer、碱性溶剂等。
3.如果提取的RNA中含有DNA时,可以使用Recombinant DNase I(RNase Free)(Code No. 270A)进行DNA消化。

Q-7:使用RNAiso Plus,加入氯仿振荡离心分层后,上清液一定是无色的吗?
A-7:

不一定。上清液的颜色与提取的材料种类有关系,有的时候会因为带有材料本身的色素而带有一定的颜色,但是经过后续的纯化,提取的RNA一般不会带有颜色的,不影响RNA的纯度。

Q-8:使用RNAiso Plus一般情况下的组织或细胞中所能提取的RNA量是多少?
A-8:

不同材料的RNA提取量请见下表:

 
组织材料 起始样品量 Total RNA提取量
全血 1 ml 15~20 μg
白细胞 1×107 约20~40 μg
小鼠肝脏 1 g 约4,000~5,000 μg
HL-60培养细胞 1×107 约100 μg
烟草叶片 1 g 约1,000 μg
小鼠肾脏 1 g 约3,000 μg
小鼠骨骼肌 1 g 约1,500 μg
小鼠脑 1 g 约1,500 μg
鲤鱼骨骼肌 1 g 约50 μg
  *:100 μl全血使用1 ml RNAiso Plus
如果收量少于预期,可能由于以下原因:
1、加入RNAiso后研磨不充分
2、三相分层时,上清液取量过少
3、RNA沉淀没有完全溶解
4、在异丙醇沉淀或清洗步骤存在RNase污染