如果使用该试剂盒出现 RNA Spin Column堵塞现象，原因可能有以下几种：
1．样品裂解不充分。样品裂解不充分会导致RNA Spin Column的堵塞。关于组织或细胞的裂解请参见操作方法中的组织或细胞的裂解。难裂解的组织建议使用液氮研磨的方法进行裂解。
2．样品起始量过多。样品量过多会造成核酸量过多而发生堵塞现象。使用该试剂盒提取的组织或细胞的最佳起始量，请参考“不同组织的最佳起始量和裂解Buffer RL使用量”。
3．离心温度过低。使用该试剂盒进行RNA提取时，如无特殊说明均在室温（20～25℃）下进行。温度过高或过低都会对RNA Spin Column造成影响，发生堵塞现象。
对于基因组含量较高或者样品起始量较大时，请不要使用gDNA Eraser Spin Coumn，以免gDNA Eraser Spin Column 发生堵塞。如果样品量较少或基因组含量较少也发生堵塞现象，则可能的原因是：
1．样品裂解不充分。样品裂解不充分会导致Column的堵塞。关于组织或细胞的裂解请参见操作方法中的组织或细胞的裂解。难裂解的组织建议使用液氮研磨的方法进行裂解。
2．样品起始量过多。样品量过多会造成核酸量过多而发生堵塞现象。使用该试剂盒提取的组织或细胞的最佳起始量，请参考“不同组织的最佳起始量和裂解Buffer RL使用量”。
3．离心温度过低。使用该试剂盒进行RNA提取时，如无特殊说明均在室温（20～25℃）下进行。离心转数过低。如发生堵塞的现象，可以加大离心转数以及离心时间。
如果 gDNA Eraser Spin Column 发生堵塞，则：
1．将样品吸出后直接进行后续实验。
2．增加离心次数和时间。
3．增大离心转数。
4．如果是基因组较多或起始量较大，不要进行gDNA Eraser Spin Column的过滤。
使用该试剂盒提取的组织或细胞的收量请参考“不同组织的RNA提取量”。如果RNA的收量过低，则可能有以下几种原因：
1．样品裂解不充分。样品的充分裂解是使用该试剂盒提取高质量RNA的关键。关于样品的裂解请参考操作方法中的组织或细胞的裂解。
2．样品起始量过多。使用该试剂盒提取的组织或细胞的最佳起始量，请参考“不同组织的最佳起始量和裂解Buffer RL使用量”。
3．RNA洗脱不充分。建议重复洗脱RNA一次。洗脱时可以将RNase Free dH2O或0.1% DEPC dH2O在RNA Spin Column 中的静置时间延长至10 分钟。
4．洗脱液中有乙醇残留。在使用Buffer RWB进行RNA Spin Column清洗后没有进行后续的离心过程，造成乙醇残留，使RNA的收量下降。建议在使用Buffer RWB清洗后再进行一次离心，以去除残留的乙醇。
如果提取时发生降解，则可能有以下几种原因：
1．使用的组织材料不够新鲜。应使用新鲜的组织材料，或将新鲜的组织材料用液氮迅速冷冻后置于-80℃保存。
2．提取RNA时使用的试剂及器具中混有RNA分解酶。实验前请参考“预防RNase污染的注意事项”，以避免RNase 污染。
3．提取的组织材料中含有大量RNA分解酶。RNA分解酶较多的组织或细胞应当减少样品起始量，并加大Buffer RL用量。
本试剂盒提供了去除基因组DNA的gDNA Eraser Spin Column，能够很好地去除材料中的基因组DNA，一般不会含有基因组DNA的污染。如果提取的RNA中含有基因组DNA污染，则可能有以下几种原因：
1．样品裂解不充分。样品不充分裂解会造成基因组DNA的残留。样品的裂解方法请参考操作方法中的组织或细胞的裂解。
2．样品起始量过多。过多的起始量使得核酸含量过多，超过gDNA Eraser Spin Column的承载量，造成基因组DNA残留。请参考“不同组织的最佳起始量和裂解Buffer RL使用量”。
3．样品的基因组DNA含量过高。不同组织中基因组DNA的含量不同，对于基因组DNA含量较高的样品，请减少样品起始量，并增加提取时Buffer RL的用量。
4．未进行DNase I的消化处理。对于部分基因组DNA含量较高的组织材料或后续实验对RNA纯度要求比较严格，则需进行DNase I的消化处理。请参考操作方法，进行DNase I的消化处理。
有关RNA的吸光度说明如下：
260 nm、320 nm、230 nm、280 nm下的吸光度分别代表了核酸、背景（溶液浑浊度）、盐浓度和蛋白质等有机物的吸光度值。OD260/OD280（R）体现了RNA中的蛋白质等有机物的污染程度，质量较好的RNA的R值应在1.8～2.0之间，当R<1.8时，溶液中蛋白质等有机物的污染比较明显；当 R>2.2时，说明RNA已经被水解成了单核苷酸。
在对核酸进行吸光度检测时，需要注意稀释液应使用TE Buffer。
RNA的浓度可以根据吸光度进行计算：
RNA浓度=（OD260-OD320）×稀释倍数×0.04 μg/μl 。
使用本试剂盒能够有效提取分子量大于200 nt的RNA。对于分子量小于200 nt的RNA，使用本试剂盒不能很好地提取。
本试剂盒只能进行简单的基因组DNA提取。基因组DNA的收量相对较低，可以进行简单的PCR扩增。当材料的基因组DNA不易提取、基因组DNA含量较低或者后续实验对基因组DNA要求较高时，请选用TaKaRa MiniBEST Universal Genomic DNA Extraction Kit Ver.5.0（Code No. 9765）进行提取，本试剂盒不承诺提取效果。
裂解组织时，可以根据不同组织材料采取不同的裂解方式，如液氮研磨、组织匀浆器、组织破碎仪（NEXT ADVANCE BBX24B）、电动研磨器BioMasher（nippi）、一次性组织研磨杵等。一般的动物组织，如肝脏、胰脏、脑等易于破碎的材料，使用本试剂盒，经验证上述方法均适用，且RNA的收量及纯度差别不明显；但对于植物组织及肌肉等富含纤维的组织材料，仍建议客户使用液氮研磨等较为剧烈、充分的破碎方法，以保证组织材料的充分裂解；当组织材料量较少（不易获得）时，建议客户使用组织破碎仪（NEXT ADVANCE BBX24B）、电动研磨器BioMasher（nippi）或一次性组织研磨杵等在裂解过程中不易丢失组织材料的裂解方法。
页面更新：2020-04-30 10:30:08
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