原因可能有以下几点:
1.挑取的菌量过多。当菌体成份较为复杂时,挑取的菌量过多会抑制PCR反应。使用牙签或枪头挑取菌落时建议蘸到即可,不可挑取太多。
2.挑取的菌量过少。菌量过少,模板DNA量少,PCR就会检测不到。关于菌量的挑取请参见“注意事项”部分。
3.使用的菌落或菌丝不够新鲜。菌体存放时间过长,使用本试剂将难以裂解,最好选取新鲜培养的菌体。
4.PCR反应时,加入裂解液的体积过大,超出PCR反应体系的1/10,建议加入裂解液的体积为反应体系的1/10以下。
不可以。酵母等细胞壁较厚,用微量移液器反复吹打起不到破碎作用,PCR检测假阴性的可能性较大。
实验验证,裂解上清液占PCR反应体系的1/20~1/10都可以有效地扩增出目的条带。但如果上清液的体积超过PCR反应体系的1/10,会影响PCR扩增效果。
本说明书中提供的裂解时间和裂解温度都是经过实验验证的最佳条件,我们建议不要更改裂解时间和裂解温度。
本试剂是一种广谱的微生物裂解液,可以裂解大多数的微生物菌体直接进行PCR检测。对于大多数革兰氏阴性菌,本试剂具有良好的裂解效果;对于大部分革兰氏阳性菌以及真菌等细胞壁较厚、成份较复杂的菌体也能裂解。但对于极少部分微生物(如放线菌),本试剂不能有效裂解。
本试剂能够裂解的微生物的菌种名称见附表,不在其中的菌种本试剂不承诺能够有效裂解。
经本试剂裂解得到的DNA含量极少,只能够用于PCR扩增反应,不适用于电泳检测或限制酶切等反应,利用琼脂糖凝胶电泳检测不到基因组DNA。
经验证,裂解上清液适用于TaKaRa Ex Taq®、TaKaRa LA Taq®以及Premix Taq™ (Ex Taq™ Version 2.0)的反应体系,其它PCR反应体系未进行评价,不承诺一定能够进行有效扩增。
页面更新:2020-04-29 15:22:50