本试剂盒适合于细菌的基因组DNA提取。基因组DNA的提取量根据细菌不同而各异，一般情况下，从2.0E+09的细菌中，可以提取约5～15 μg的基因组DNA；从2.0E+09的E.coli JM109细胞中，可以提取约10 μg的基因组DNA；从2.0E+09的Staphylococcus aureus 细胞中，可以提取约6 μg的基因组DNA。
基因组DNA收量较低时，可以从以下几个方面考虑：
1．实验材料量太少，比如从2.0E+06细菌中提取的基因组DNA是电泳检测不到的；
2．裂解不充分，DNA未充分释放。由于各种细菌细胞壁的结构差异较大，所以裂解条件也有所差异，菌体完全裂解后应呈透明、澄清状，且当DNA含量较高时，溶液较粘稠。裂解不充分时，溶液呈浑浊状，可以适当延长Lysozyme（20 mg/ml）作用时间或增加使用量，或增加Buffer GL的使用量；
3．提取的细菌中基因组DNA含量较少，适当增加菌体使用量；
4．菌体量过大，裂解困难，按比例适当增加Lysozyme、Buffer GL的加量或分成多份进行提取；
5．洗脱时将灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至65℃后使用将有利于提高洗脱效率；
6．请严格按照操作方法进行操作。
提取的基因组DNA有降解，可以从以下几个方面考虑：
1．细菌不够新鲜，收集后的细菌未及时处理或未低温保存。我们建议材料应尽量在-80℃保存，运输过程中亦应使用干冰等。
2．材料本身有残留的DNA酶活性。可以增加一次Buffer WA的清洗操作。
3．如需长期保存提取的DNA，请用Elution Buffer溶出。
提取的基因组DNA中有RNA污染，可以从以下几个方面考虑：
1．实验过程中没有使用RNase A。应严格按照实验操作要求使用RNase A。
2．RNase A可能失活。RNase A尽可能在-20℃下保存，RNase A活性比较稳定，一般不易失活。
提取的基因组DNA反应性能差，可以从以下几个方面考虑：
1．提取的基因组DNA中盐份浓度过高。在使用Buffer WA和Buffer WB进行DNA制备膜的清洗时，请沿Spin Column的管壁四周加入，且加入Buffer WB后室温静置5分钟，有助于彻底清洗掉Column上残留的盐离子，这样有利于提高清洗效果。
2．洗脱液中残留乙醇，在向Column中加入洗脱液之前，将Column在室温下静置2分钟有助于使Column上残留的乙醇彻底挥发，然后再加入洗脱液洗脱。
3．进行DNA洗脱时请一定在膜的中央加入洗脱液，尽量不要沾染Spin Column的管壁四周。
本试剂盒主要用于小量基因组DNA的制备，当菌体量超出说明书的要求用量时，可以按比例适当增加Lysozyme、Buffer GL及Buffer GB的用量，裂解后分到多个Spin column中进行实验操作。菌体量最好控制在规定范围内，否则会影响裂解和收量，如果裂解不充分会堵塞Spin column，造成实验失败。
一般情况下LB过夜培养的Escherichia.coli JM109 OD600≈3～4 OD/ml，0.5 ml集菌即可，即菌体起始量2 OD（约1.0～2.0E+09 cells）为宜。菌体起始量不可过多，否则裂解不够充分会堵塞Spin column，从而导致DNA收量降低。
本试剂盒可以进行绝大多数革兰氏阴性和阳性细菌的基因组DNA提取，但是有个别革兰氏阳性菌（如：Bacillus thuringiensis（苏云金杆菌）的细胞壁结构比较特殊，裂解较困难，DNA提取量稍少。如果遇到裂解较困难的细菌可先进行液氮研磨等物理破碎方法，然后按照革兰氏阴性细菌的操作方法进行基因组DNA提取。
页面更新：2020-04-29 14:54:50
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