本试剂盒适合于植物材料基因组DNA的提取。基因组DNA的提取量因材料不同而各异,一般情况下,从100 mg的植物材料中,可以提取约1~10 μg的基因组DNA。植物材料的DNA含量一般较低,尤其是含水分较多的植物果实及生长状况较老的叶片。幼嫩的植物叶苗及植物种子中基因组DNA含量相对丰富,且植物的DNA含量和植物的生长状态有很大关系,如果想要获得高品质的DNA请使用幼嫩的植物材料,否则可能得不到完整的DNA。
基因组DNA收量较低时,可以从以下几个方面考虑:
1.实验材料本身DNA含量低,比如从100 mg苹果果肉中仅能提取得到约几十纳克的基因组DNA;
2.液氮研磨不充分,DNA未充分释放。植物材料是需要进行液氮研磨的,所以充分的液氮研磨是获得高品质DNA的关键;
3.选材不当,处于生长中期或末期的植物材料DNA含量较低,甚至是不完整的DNA;
4.洗脱时将灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至65℃后使用将有利于提高洗脱效率;
5.请严格按照操作方法进行操作。
1.材料不够新鲜,收集后的材料未及时处理或未低温保存。我们建议材料应尽量在-80℃保存,运输过程中亦应使用干冰等。
2.材料本身有残留的DNA酶活性。可以增加一次Buffer WA的清洗操作。
3.如需长期保存提取的DNA,请使用Elution Buffer洗脱。
1.实验过程中没有使用RNase A。应严格按照实验操作要求使用RNase A。
2.RNase A可能失活。RNase A尽可能在-20℃下保存,RNase A活性比较稳定,一般不易失活。
1.提取的基因组DNA中盐份浓度过高。在使用Buffer WA和Buffer WB进行DNA制备膜的清洗时,请沿Spin Column的管壁四周加入,有助于彻底清洗掉Column上残留的盐离子,这样有利于提高清洗效果。
2.洗脱液中残留乙醇,在向Spin Column中加入洗脱液之前,将Spin Column在室温下静置2分钟有助于使Spin Column上残留的乙醇彻底挥发,然后再加入洗脱液洗脱。
3.进行DNA洗脱时请一定在膜的中央加入洗脱液,尽量不要沾染Spin Column的管壁四周。
页面更新:2020-04-29 14:44:36