我们使用cookie改善您的浏览体验并提供有意义的内容。请阅读我们的cookie协议
收藏我们 在线订购
     

机构用户解决方案

产品选择指南

技术服务信息

Q-1:一般情况下组织或细胞中所能提取的DNA量如何?
A-1:

   一般情况下组织或细胞中所能提取的DNA量如下表:

组织材料 起始样品量 基因组DNA提取量
肝脏 100 mg 300~400 μg
肾脏 100 mg 300~400 μg
100 mg 200~300 μg
心脏 100 mg 200~300 μg
HL60培养细胞 1×107 50~70 μg
植物叶片 1 g 20~200 μg
E.coli Cells 1×109 30~40 μg
Q-2:DNA的吸光度代表什么?
A-2:

260 nm、320 nm、230 nm、280 nm下的吸光度分别代表了核酸、背景(溶液浑浊度)、盐浓度和蛋白质等有机物的吸光度值。OD260/OD280(R)体现了DNA中的蛋白质等有机物的污染程度,质量较好的DNA的R值应在1.8~2.0之间,当R<1.8时,溶液中的蛋白质等有机物的污染比较明显;当R>2.2时,说明DNA已经被水解成了单核苷酸。
在对核酸进行吸光度检测时,需要注意稀释液应使用TE Buffer。

Q-3:如何计算DNA的浓度?
A-3:

DNA浓度=(OD260-OD320)×稀释倍数×0.05 μg/μl。

Q-4:基因组DNA提取量较低怎么办?
A-4:

可以参考如下建议进行改进:
1.向组织材料中加入DNAiso Reagent后,请充分研磨、匀浆,使其充分裂解。
2.组织材料中的DNA含量较少,提高起始材料使用量,本试剂不适用于微量组织材料DNA的提取。
3.增加DNAiso Reagent的添加量。

Q-5:提取的基因组DNA不溶怎么办?
A-5:

可以参考如下建议进行改进:
1.75%乙醇清洗沉淀后不要干燥时间过长或加热干燥。
2.基因组DNA在dH2O或TE Buffer中不易完全溶解,可以换成8 mM NaOH溶解。
3.当基因组DNA的量过大时不易溶解,可以加长溶解时间或轻轻摇动离心管以促进溶解。

Q-6:OD260/OD280值<1.65,为什么?
A-6:

可能的原因如下:
1.DNA应使用TE Buffer稀释后再进行吸光度值的测定,低离子强度或低pH值会使OD280值升高。
2.样品裂解时加入的DNAiso Reagent量偏少,造成蛋白质变性不充分,可以再次对DNA溶液进行苯酚/氯仿抽提,以除去蛋白质。
3.基因组DNA 未充分溶解。

Q-7:提取的基因组DNA降解,为什么?
A-7:

提取的基因组DNA可能降解的原因如下:
1.使用的组织材料不够新鲜。提取基因组DNA的组织材料应采用新鲜的组织材料,或将新鲜的组织材料用液氮迅速冷冻后置于-80℃保存。
2.操作剧烈造成基因组DNA断裂,破坏了基因组DNA的完整性。

Q-8:提取的基因组DNA中含有RNA污染,为什么?
A-8:

提取的基因组DNA中含有RNA污染,可能的原因如下:
1.组织材料或细胞裂解后未使用离心法除去RNA。
2.提取出的基因组DNA量较少时,采用离心法而未使用缠绕法收集基因组DNA沉淀,容易带来RNA污染。
3.如果提取的基因组DNA中含有RNA时,可以对提取的基因组DNA进行一次LiCl沉淀,以除去RNA污染,或者使用RNase进行处理。