可以根据所需浓度计算使用洗脱液的体积,一般情况下,洗脱液体积大于30 μl即可洗脱Column中90%以上的DNA,所以洗脱液体积最好大于30 μl,当对DNA浓度要求较高时,也可以减少洗脱液体积至20 μl,但回收率会略有下降,应注意使用预热的洗脱液洗脱,并在洗脱离心之前静置1分钟以上,以增加洗脱效率。
本试剂盒中Column一次回收的最大吸附量可达20 μg以上,最小DNA起始量也可低至500 ng所以使用前请对DNA样品的总量进行估算。
一般情况下,DNA的回收率可以达到70-95%。DNA收量较低时,可以从以下几个方面考虑:
① 使用前确认Buffer WB中是否加入了指定体积的乙醇。
② 洗脱前的空离步骤不可省略,此步骤可以除去Column上残留的洗液中的乙醇,否则影响洗脱效率。
③ 洗脱时将灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至60℃后使用有利于提高洗脱效率。
① 洗脱液中残留部分盐离子,加入Buffer WB后室温静置5分钟,有助于彻底清洗掉Column上残留的盐离子。
② 洗脱液中残留乙醇,在向Column中加入洗脱液之前,将Column在室温下静置2分钟有助于使Column上残留的乙醇彻底挥发,然后再加入洗脱液洗脱。
③ 进行DNA洗脱时用灭菌蒸馏水洗脱。
页面更新:2020-04-28 14:54:48