| 各种Reverse Transcriptase的区别如下:
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合成不了长链cDNA的原因如下：
1. RNase的原因（cDNA的电泳谱带出现模糊）。
对使用的器具、试剂请尽可能干热或者湿热灭菌处理。同时，在反应时请加入Recombinant RNase Inhibitor。
2. 反应条件不适合（cDNA的合成量少）。
请通过预备实验探讨适合的反应条件，此时所要研讨的项目包括：酶量、盐浓度、反应温度（37～65℃）、DTT浓度（0.5～10 mM）。
3. RNA结构上的问题（出现低分子带）。
尝试提高反应温度，请使用随机引物。
使用Recombinant RNase Inhibitor要注意以下问题：
1. 抑制活性的pH值范围较广，在pH7～8时表现最大活性。
2. 不要稀释使用。蛋白浓度过低易失活，而搅拌更易失活，因此建议尽量使用原液填加到反应体系中。
3. 起泡或强烈搅拌（Vortex等）会引起失活。
4. 不抑制RNase H活性。
使用例
cDNA第一条链的合成。
1. 在微量离心管中配制下列反应液，全量为20 μl。
| 模板RNA | 1 | μg | |
| 5 × Reverse Transcriptase XL Buffer* | 4 | μl | |
| dNTP Mixture（10 mM each） | 2 | μl | |
| Oligo(dT)18 Primer或Random Primer（6-9 mer） | 50 | pmol | |
| Recombinant RNase Inhibitor | 20 | U | |
| AMV Rtase | 5 | U | |
| DEPC H2O | Up to 20 | μl | |
| * AMV（Code No. 2621）制品中附有。 | |||
2. 轻轻搅拌。
3. 室温下10分钟放置后，移入42℃恒温槽中。
4. 42℃保温1小时。
5. 把样品移入冰中冷却2分钟。
（得到的反应液可用于cDNA第二条链的合成。）
页面更新：2020-04-27 10:40:10
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