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机构用户解决方案

产品选择指南

技术服务信息

Q-1:酵母单杂交bait在设计上有什么要求?
A-1:

   在设计酵母单杂交bait时需要考虑两点:顺式作用元件(cis-acting element)和启动子序列。
   ①使用cis-acting元件:
    ■ 使用最少数量的cis-acting元件,cis-acting元件超过20bp时会增加非特异性结合。Clontech
       检测的最长的单拷贝cis-acting元件为20bp。
    ■ 如果你的cis-acting元件超过100bp,使用1个或2个拷贝。需要注意的是这么长的片段会提高假
       阳性。
   ②使用启动子序列:
    ■ bait中不要包含TATA box。
    ■ 拷贝数:如果启动子序列小于100 bp,使用2个拷贝作为bait。如果超过100 bp,使用1个拷贝
       作为bait。
    ■ 检测假阳性:构建好bait菌株后,检测报告基因的本底表达,以确认任何非特异报告基因激活
       (参考操作手册)。

Q-2:pAbAi空载体可以作为阴性对照使用吗?
A-2:

   pAbAi空载的多克隆位点中Sma I和Xho I之间存在隐蔽的启动子,这个MCS可以被某些酵母体内蛋白
   识别。如果这段识别序列是完整的,pAbAi载体会表现出自激活活性。因此,我们推荐退火后的核苷
   酸(插入片段)的3’端带有Sal I了或Xho I酶切位点,而5’端可以是MCS中Sma I位点上游的任意的
   单一酶切位点。同时,推荐采用mutant bait做为阴性对照。  

页面更新:2015-01-14 11:19:11