YPD（Yeast Extract Peptone Dextrose Medium）培养基是酵母完全培养基，包含氨基酸、盐、
葡萄糖和其他营养物质，有利于酵母快速生长。YPDA培养基是在YPD培养基中添加120 mg/L的硫
酸腺嘌呤，可以防止含有ADE2突变等位基因的酵母菌株变成粉红色或红色。YPDA培养基中硫酸腺
嘌呤的终浓度是标准配方（40 mg/L）中的3倍，如果你采用其他来源的培养基，Matchmaker酵母
菌株可能会变成粉红色或红色。
SD（synthetically defined）培养基是用于S. cerevisiae常规培养的基本培养基。
Clontech提供的SD Base可以提供野生型酵母菌维持生存所需的基本物质，包括氮源和碳源，但不
包含突变菌株必需的氨基酸。将选择性必需氨基酸添加到SD Base中可以配制特异的基本培养基，
Clontech提供预混的选择培养基Yeast Media Pouches和Yeast Media Sets。你也可以购买SD
Base和选择性氨基酸补充剂（DO），根据需要配制。特异的基本培养基用于选择培养含有特异载体
的酵母或杂交筛选。
● 例如，SD Base添加-Leu或-Trp DO Supplement用于筛选Matchmaker bait和prey载体。
SD/-Leu/-Trp DDO，双缺培养基，之所以这么叫是因为培养基中添加的必需氨基酸中缺失了
亮氨酸和色氨酸。bait和prey载体带有可以合成色氨酸和亮氨酸的基因，因此携带这两个载体的
酵母细胞可以在DDO上生长，而亲代酵母菌株（如Y2H Gold）不含有这两个基因。Clontech提
供多种DO Supplement。
Aureobasidin A（AbA）是一种环状缩肽抗生素，对S. cerevisiae具有毒性。Matchmaker Gold
System是独一无二的，因为该系统采用了AUR1-C基因作为全新的报告基因，这个基因可以产生
Aureobasidin A（AbA）抗性。利用AbA这种高稳定性的抗真菌缩肽，可以简化酵母双杂交文库筛
选，而无需像单独采用营养筛选（如HIS3）一样进行优化。
不可以，X-Gal与X-a-Gal不同。X-Gal是E.coli β-半乳糖苷酶（lacZ）的反应底物，而
X-a-Gal是酵母α-半乳糖苷酶（Mel 1p）的反应底物。X-a-Gal在Matchmaker Gold系统中
用作蓝白筛选的筛选标记，在蛋白互作激活MEL1基因表达后，酵母细胞可以分泌表达Mel 1p。
ADE2或ADE1菌株在低含量腺嘌呤培养基上生长时表现出的红色是嘌呤前体积累造成的。Clontech
推荐所有的酵母菌株采用YPDA培养基培养，该培养基中添加了120 mg/L的硫酸腺嘌呤可以避免色
素的积累。这些色素的特征不是很清楚，有一些化学分析在1967年发表[1]。这些色素看起来在胞浆
中积累[2]，发射450-490 nm荧光。
● [1]. Smirnov, M. N. et al. (1967) Biochem. Biophys. Res. Comm. 27(3):299–304.
● [2]. Weisman, L.S. et al. (1987) J. Cell Biol. 105(4):1539–1547.
琼脂添加量正确的情况下（20 g/L），培养基不凝固可能是由于灭菌时间过长和pH值偏低造成的。
部分地区的水质偏酸，这种情况下，调整SD基本培养基的pH值至5.8，YPDA培养基的pH值至6.5，
121℃，15min高压灭菌。
一般来说，保存于25%甘油的酵母菌株在每次解冻后会丢失10%的活力细胞。因此，大多数冻存的
酵母在融化温度不超过室温而且操作小心的条件下，最多可容忍10次冻融。有两个例外情况请注
意：预制的酵母文库和酵母感受态细胞。为筛选到基因覆盖度最广的文库，预制的酵母文库一旦解
冻，就必须立即使用且不要重新冻存。同样，为得到最高转化效率，酵母感受态细胞应该立即使用
且避免冻存。
页面更新：2015-01-14 13:10:02
京公网安备 110114000405号