答案是否定的。大量的In-Fusion酶对于某些大肠杆菌菌株来说是有毒性作用的，因此不建议采用超
过推荐用量来转化感受态细胞。如果需要更多的克隆，我们建议进行多重转化。
试剂盒中提供的阴性对照通常会产生少于5个的蓝斑；白斑的数量根据使用菌株的不同而有所不同。
通常情况下，实验组平板上背景比例大概不到5%。我们猜测背景是由于细胞自身的重组功能所产
生的，某些E.coli菌株（即使是recA1突变的菌株）也可以产生低水平的同源重组事件（远远低于
In-Fusion酶的重组概率）。这与我们观察到的实验平板上98%的克隆是正确的这一点是一致的。
• 采用转化效率超过108 cfu/μg的高效感受态细胞。大多数自制的感受态细胞效率相对较低，尤其
是使用前储存过一段时间的感受态细胞。我们推荐采用针对In-Fusion优化的Stellar™ Competent
Cells (Code No. 636763)。
• 扩增后的PCR片段必须经过纯化操作以去除dNTPs。
• 如果您使用的不是商业化的纯化试剂盒，胶纯化后应该进行酚氯仿抽提以移除杂质。
• 合成高质量的引物确保同源序列部分是正确的。
不推荐使用的感受态细胞为TOP10或者其衍生类细胞（比如ccdB Survival™ 2 T1R E. coli），
以及其它相关菌株（DH10B, MC1061）。原因是在这些细胞中In-Fusion连接产物可能存在不稳定
性（或者可能发生基因重排）。同样，其他不适用于不稳定DNA克隆的感受态细胞也不推荐使用。
页面更新：2015-01-06 10:23:35
京公网安备 110114000405号