In-Fusion克隆无需去磷酸化处理线性化载体。去磷酸化处理并不有利于克隆过程，同时对DNA末端
有损伤作用，因此不建议进行去磷酸化处理。
A-尾不会影响In-Fusion克隆反应的进行以及所克隆基因的读码框。
注意：我们建议您使用高保真PCR扩增酶而不使用Taq聚合酶，以确保PCR产物的正确性。
不是。如果PCR产物琼脂糖凝胶结果显示为单一清晰的条带（例如无背景条带或者弥散现象），您
也可以采用Cloning Enhancer处理PCR产物而无需进行进一步的纯化处理，或者采用离心柱进行纯
化。如果PCR产物小于350 bp，我们建议采用Cloning Enhancer进行处理以减少样品损失。
如果PCR产物包含非特异性背景条带则应该采用胶纯化方式分离纯化目的片段。对于In-Fusion克
隆，我们推荐采用NucleoSpin Gel and PCR Clean-Up进行PCR产物纯化。
载体和插入的DNA片段即使超过10 kb也可以进行连接反应，只是连接效率会有所降低。In-Fusion
系统最长可以克隆15 kb的DNA片段，8-15 kb的克隆效率会有所降低。插入的DNA片段只要不少于
50 bp就可进行有效的连接反应。
In-Fusion可以克隆的最大的载体大小为46 kb。
Cloning Enhance用于移除模板DNA背景和PCR残留，当PCR产物单一时（例如没有背景的情况
下）无需在克隆前对插入片段进行胶纯化处理。
推荐插入片段和线性化载体的摩尔比例关系为2:1。当插入片段介于100-300 bp之间时，推荐摩尔
比例为5:1或者10:1，当插入片段小于100 bp而大于50 bp时，推荐摩尔比例为10:1或者50:1。
页面更新：2015-01-06 10:17:55
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