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优质试剂构筑坚实防线——Takara痘病毒检测解决方案毒
 
■ 关于猴痘病毒
 
根据世卫组织数据,全球多国爆发猴痘病毒,欧美多国病例持续增加,截至5月26日,累计向世卫组织报告实验室确诊病例257例,疑似病例约120例。情况正在迅速发展,世卫组织预计,随着在非流行国家以及最近未报告病例的已知流行国家中扩大监测,将发现更多病例。
 
猴痘是由猴痘病毒引起的一种疾病,是一种病毒性人畜共患疾病。猴痘病毒 (MPV) 属于痘病毒科正痘病毒属,痘病毒家族是一种巨大的包膜病毒,生长在受感染细胞的细胞质中,具有双链DNA作为遗传物质。
 
2002年发表的文献《Analysis of the monkeypox virus genome》对196,858 bp猴痘病毒基因组进行了结构特征和开放阅读框分析,基因组的每一端都包含一个序列相同但方向相反的6,379 bp末端反向重复,这与其他正痘病毒相似,包括一个推测的端粒序列和短串联重复。
 
本次猴痘病毒爆发后,2022年5月4日,葡萄牙研究人员在virological网站上,以论文形式公布了对一名葡萄牙男性患者携带的猴痘病毒的基因组测序结果。5月23日,在该网站上,公布了另外9份葡萄牙感染者所携带的猴痘病毒基因组序列。至此,全球科学家已得到了13份最新猴痘病毒基因测序结果,样本分别来自葡萄牙、德国、比利时、美国。
 
■ Takara猴痘病毒检测解决方案
 
提高防范意识和检测能力,对预防病毒进一步传播扩散至关重要,已有多家IVD企业迅速研发qPCR方法进行猴痘病毒核酸检测的试剂盒。Takara作为高质量检测原料供应商,可以提供从引物、探针合成、核酸提取、PCR扩增试剂等在内的完整解决方案。
 
测用引物、探针合成
根据中华人民共和国出入境检验检疫行业标准,通过探针法qPCR检测猴痘病毒的引物和探针序列参考如下。
 


Takara Oligo DNA/RNA合成的优势
· 二十余年的引物、探针合成经验
· 原料控制、生产过程控制,以及质量控制,严格按照ISO质量管理体系进行标准化管理;
· 完善的品质管理,最大限度控制Oligo合成的批间差,实现很好的重复性和稳定性;
· 多种防污染措施,在洁净环境中进行产品的制造和分装。
· 为众多IVD企业提供检测用引物、探针原料。

 
病毒核酸提取
SN/T 2097-2008《入出境人员猴痘检验规程》中,使用了旧版本Takara基因组DNA提取试剂盒,对样本基因组DNA进行提取。该标准中样本处理方法,包括皮疹、痂皮等病变组织和水疱液、脓疱液及病人血液样本,可供参考。
 
TaKaRa MiniBEST Universal Genomic DNA Extraction Kit Ver.5.0 (Code No. 9765)
>> 本产品是优化升级的gDNA提取试剂盒,具有高效、快速、方便的特点。
>> 组织细胞裂解后,提取操作仅需20分钟便可完成。
>> 可得到多至数十微克的高纯度基因组DNA,用于下游实验。
 
TaKaRa MiniBEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver.5.0(Code No. 9766)
>> 本试剂盒是专门用于从血浆、全血、无细胞体液、病毒原液和感染病毒的组织中提取各种病毒 (Virus) RNA/DNA的小量纯化试剂盒。
>>试剂盒采用了特别的病毒裂解系统,裂解病毒释放RNA或DNA,再结合核酸制备膜技术纯化RNA或DNA,适用于各种RNA或DNA病毒的核酸提取。
>>本试剂盒已被广泛用于新冠病毒、非洲猪瘟病毒等多种病毒核酸的提取。
 
qPCR检测原料
Premix Ex Taq (Probe qPCR) (Code No. RR390)
>> 采用探针法进行Real Time PCR (qPCR) 反应的专用试剂。
>> 可用于快速PCR程序。
>> 2X 浓度的Premix Type试剂, PCR反应液的配制十分方便简单。
>> 本制品可以在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线,对靶基因进行准确定量、检测,重复性好,可信度高。
 
<在各种Real Time PCR仪上反应稳定>
 
Probe qPCR Mix (or with UNG)(Code No. RR391/392)
>> 对添加了抗体的Hot Start PCR酶和Buffer分别进行了改良,实现了对PCR阻害物抵抗性高、扩增特异性高、扩增效率高、检测灵敏度高。
>> RR392为添加UNG版本,防止假阳性产生。
>> 增强了对PCR阻害物的抵抗性
在进行食品和环境来源样品的靶基因DNA检测及基因分型时,受PCR反应阻害物影响导致检测灵敏度下降及假阴性结果困扰的研究人员请一定尝试使用!
>> 适用于快速qPCR反应条件
已证实使用各公司qPCR扩增仪均可以进行良好的扩增反应。即使在反应时间为40分钟的快速PCR反应条件下也可获得重复性高的PCR结果。
 
实验例
各种PCR阻害物对Ct值的影响评价
已知血红素(血液成分)、腐植酸(土壤成分)、黑色素(皮肤和毛发成分)、单宁酸(植物成分)对PCR反应有很强的阻害作用,对在PCR反应中添加PCR阻害物的反应体系和未添加PCR阻害物的反应体系进行了Ct值比较。
本制品同其他公司同类制品相比,对PCR阻害物的抵抗性显著提高,使用目前为止不能获得良好反应结果的检测样品也能够期待获得高成功率、高检测灵敏度的PCR反应。
 
防污染相关产品
qPCR检测方法因其高灵敏度的特性,时常会发生被之前扩增PCR产物等污染,而产生无模板对照实验起峰或检测假阳性的现象。
 
建议检测实验室使用DNA-OFF® 去除实验区域的DNA污染,使用包含UNG的试剂,去除前次PCR产物造成的污染。
 
 
扫描下方二维码,可申请本文中猴痘病毒检测相关产品试用装。
 
(本次试用活动仅限工业客户和猴痘病毒研究客户参与)
 
 
 
 

页面更新:2022-08-24 08:44:37