| 如果病毒基因组为DNA，如非洲猪瘟病毒，无需反转录，只需要进行探针法的qPCR检测。 Takara多种试剂，不同的特点，同样的高效，根据需求选择合适的高质量试剂，事半功倍。 |
| 1) 经典产品，被大量检测机构选择——Premix Ex Taq™ (Probe qPCR)（Code No. RR390） |
| · 探针法Premix Type试剂，操作简单方便，可以快速、准确地对目的基因进行检测、定量。 · DNA聚合酶使用了TaKaRa Ex Taq HS，可以进行Hot Start法PCR反应，再与Takara公司特别开发的Buffer系统相结合，具有高扩增效率、高扩增灵敏度的特点。 · 在2X 浓度的Premix中，预先添加了耐热性RNaseH (Tli RNaseH)，可以很好地抑制以cDNA作为模板进行PCR反应时，由于cDNA中残存mRNA对PCR反应造成的阻害作用。 |
| 重点文献推荐： |
| Teng, Q. et al. Development of a TaqMan MGB RT-PCR for the rapid detection of H3 subtype avian influenza virus
circulating in China. J. Virol. Methods 217, 64-69 (2015). RR390A用于H3禽流感病毒的高灵敏度且快速检测。该方法是传统qPCR方法的灵敏度1,000倍以上，可以检测到10拷贝/反应。 |
| Kim, H.-R. et al. Multiplex real-time polymerase chain reaction for the differential detection of porcine circovirus 2 and 3. J. Virol. Methods 250, 11-16 (2017). 使用RR390A建立了一种快速鉴别猪圆环病毒2型和3型的多重qPCR检测方法。可以高灵敏度、可重复地检测低至50拷贝。批次内及批次间差异小于4%。 |
| 2) 适用于快速反应的增强版探针法试剂——Probe qPCR Mix（Code No. RR391） |
| · 增强了对PCR阻害物的抵抗性在进行靶基因DNA检测及基因分型时，受PCR反应阻害物影响导致检测灵敏度下降及假阴性结果困扰的研究人员请一定尝试使用！ · 适用于快速 qPCR反应条件已证实使用各公司 qPCR仪均可以进行良好的扩增反应。即使在反应时间为40分钟的快速PCR反应条件下也可获得重复性高的qPCR结果 |
| 使用同一master mix进行单一和多重反应 |
 RR390A适用于单一和多重反应。使用RR390A以小鼠cDNA为模板对 或 基因进行检测。在单一和多重反应中Ct值相当，表明RR390A适用于两种实验模式。 |
Primer/probe：Applied Biosystems TaqMan Gene Expression Assays
模板：小鼠来源的cDNA（相当于total RNA 1 pg～100 ng） qPCR仪器：Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System 小鼠肝脏来源的cDNA稀释液作为模板，分别单独检测Gapdh和Ptprf基因，与multiplex qPCR进行比较实验。 经过确认，multiplex qPCR与单独检测可获得相同的定量结果。 |
| 实验例：各种PCR阻害物对Ct值的影响评价 |
已知血红素（血液成分）、腐植酸（土壤成分）、黑色素（皮肤和毛发成分）、单宁酸（植物成分）对PCR反应有很强的阻害作用。
使用RR391和T公司试剂，比较无阻害物和添加阻害物体系的Ct值变化。  ·体系中无阻害物时，RR391和T公司试剂得到的Ct值相近，产品性能相当。
·体系中含有血红素、腐植酸等阻害物时，无论模板浓度高低，使用RR391均可以获得和无阻害物反应接近的Ct值，说明RR391对各种阻害物的抵抗性非常高。 ·而使用T公司同类产品时，体系中含有血红素和单宁酸时，无论模板浓度高低，都无法被检出。体系中含有腐植酸和黑色素时，Ct值普遍滞后，尤其当模板浓度较低时，无法检出，检测灵敏度下降。 |
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