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Takara IVTpro mRNA Synthesis System
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara 6141 Takara IVTpro mRNA Synthesis System 1 Kit ¥4,973
Takara 6143 Cloning Kit for mRNA Template 10 Rxns ¥1,531
Takara 6144 Takara IVTpro T7 mRNA Synthesis Kit 20 Rxns ¥3,442
 
一款合成高质量、高产量mRNA的体外转录(IVT)试剂盒
·通过体外转录(IVT)合成带有Cap结构和Poly(A)序列的mRNA;
·优化的T7 RNA聚合酶用于IVT反应,RNA合成效率高、产量大;
·独立包装的NTPs,方便修饰NTPs替换,且不影响mRNA产量;
·采用In-Fusion无缝克隆,轻松构建模板质粒DNA;
·使用氯化锂(LiCl)溶液进行RNA纯化,可立即进行下游应用。
 
■ 制品说明
Takara IVTpro mRNA Synthesis System是能够简便、高效合成带有Cap结构和Poly(A)序列的mRNA的体外转录试剂盒。它包含以下两种制品:
① Cloning Kit for mRNA Template(Code No. 6143):
本试剂盒用于将模板DNA无缝克隆到预线性化载体(包含在本试剂盒中)中构建用于体外转录反应的模板质粒。预线性化载体中包含T7 启动子、转录起始序列 (AGG)、5'-UTR(非编码区)、3'-UTR、和105-base Poly(A) 序列。试剂盒还包含用于将目标DNA无缝克隆到预线性化载体的In-Fusion Snap Assembly Master Mix和FLuc对照片段(包括15 bp,3' In-Fusion sequence;FLuc CDS;和15 bp,5' In-Fusion sequence)。
 
② Takara IVTpro T7 mRNA Synthesis Kit(Code No. 6144):
本试剂盒以含有 T7 启动子序列的双链 DNA 为模板,使用优化的高效T7 RNA聚合酶,通过体外转录可合成大量mRNA。除此以外,还包含用于IVT反应后消化模板DNA的DNase I和用于纯化mRNA的氯化锂 (LiCl) 溶液。真核细胞翻译蛋白质需要RNA的5'端有Cap结构,本试剂盒配合使用CleanCap Reagent AG(TriLink公司的Cap类似物)可以高效制备具有Cap结构的mRNA。另外,试剂盒包含单独的NTPs,方便优化或使用修饰NTPs如假尿苷替换,而且不会明显降低mRNA的产量。使用本产品,每次反应(20 μl 反应体系)可以合成高达 200μg 或更多的RNA。可以根据需要放大反应体系,即使使用10倍(200μl)反应体系也不影响mRNA预期产量(请参考说明书实验例)。※Cap类似物不包含在本产品中,请另外准备CleanCap Reagent AG (TriLink公司)。
 
 
使用Takara IVTpro 系统合成 mRNA时,通过In-Fusion方法克隆目标基因(GOI)后,使用不会在 Poly (A) 下游留下额外序列的限制性内切酶切割是非常重要的。强烈建议使用 Hind III(Code No. 1060A/B)对用于mRNA合成的质粒进行线性化(请参考说明书和载体图谱信息)。
 
■ 用途
· 用于体外转录(IVT)模板质粒DNA的构建
· 配合使用TriLink公司的CleanCap Reagent AG体外转录合成mRNA
· 使用其它Cap类似物如Anti-Reverse Cap Analog (ARCA)合成带帽结构的mRNA
(* 请注意,使用ARCA时,需要设计与本产品不同的模板序列。)
· 用于长链非编码RNA(Long non-coding RNA)的合成
· 向导RNA(guide RNA)的合成
· siRNA前体的合成
· 用于RT-qPCR的RNA标准模板的合成
· RNA探针的合成
 
■ 制品内容
Cloning Kit for mRNA Template(Code No. 6143)(10次反应)
 
产品组分 体积量 件数/Kit
1. Linearized Template Vector (50 ng/μl)  10 μl 1
2. FLuc Control Fragment (100 ng/μl) *1  10 μl 1
3. 5X In-Fusion Snap Assembly Master Mix  20 μl 1
 
*1:由 In-Fusion 序列 (15 bp) + FLuc-CDS + In-Fusion 序列 (15 bp) 组成的对照片段 (1,683 bp)
 
Takara IVTpro T7 mRNA Synthesis Kit(Code No. 6144)(20次量、20 μl反应体系)
 
产品组分 体积量 件数/Kit
1. 10X Transcription Buffer  40 μl 1
2. 10X ATP  40 μl 1
3. 10X CTP  40 μl 1
4. 10X GTP  40 μl 1
5. 10X UTP  40 μl 1
6. 10X Enzyme Mix  40 μl 1
7. Nuclease-Free Water  1 ml 3
8. DNase I  80 μl 1
9. Lithium Chloride Precipitation Solution  600 μl 1
10. Positive Control Template (FLuc) (0.5 μg/μl)2  10 μl 1
 
*2:由T7 启动子 + 5'UTR + FLuc-CDS + 3'UTR + Poly (A) 序列组成的线性质粒DNA。
 
■ 实验操作注意事项
· 本制品是通过IVT反应合成RNA的试剂。如果双链DNA模板、试剂、试管、微量移液器吸头或反应中使用的其他材料混入RNase污染,会导致使用本试剂盒获得的RNA收量降低或片段化。在反应中使用专用试管和微量移液器吸头,并戴上新的一次性手套以防止RNase污染。
· 10X Enzyme Mix 不要剧烈搅拌。
· 使用前将Lithium Chloride Precipitation Solution在室温下融化。融解后,如果充分混合后仍可见沉淀,可37℃保温溶解。如果仍有沉淀物,请直接使用,对性能没有影响。
 
■ 保存
-20℃
 
■ 试剂盒以外的其它必要试剂(主要试剂)
· CleanCap Reagent AG(TriLink公司)
· 修饰NTPs
· 限制酶(Hind III等等)
 
■ 序列信息 FLuc Control Fragment
序列信息(fasta格式):点此进行下载
该序列与Positive Control Template(FLuc)中2,685~4,367(1,683 bp)的序列相同。
 
■ 序列信息 Linearized Template Vector
序列信息(fasta格式):点此进行下载
Linearized Template Vector(2,921 bp)
 
 
NeoR/KanR: 53~847
Ori: 1,172~1,760
CMV enhancer: 1,861~2,240
CMV promoter: 2,241~2,444
 
T7 promoter sequence: 2,489~2,505
Transcription start sequence (AGG): 2,506~2,508
5’UTR: 2,509~2,559
Upstream In-Fusion region (15 bp): 2,545~2,559
 
In-Fusion cloning site (linearized site): between 2,559 and 2,560
 
Downstream In-Fusion region (15 bp): 2,560~2,574
3’UTR: 2,560~2,672
Poly(A)105: 2,673~2,777
Restriction enzyme sites for plasmid linearization: 2,776~2,801(Hind III, Xho I, Sal I, Avr II, BamH I)
 
Poly(A) Forward Primer: 2,570~2,589
Poly(A) Reverse Primer: 2,863~2,882
 
<T7启动子后序列的详细信息>
 
■ 载体信息 Positive Control Template(FLuc)
序列信息(fasta格式):点此进行下载
 
Positive Control Template(FLuc)(4,574 bp)
 
NeoR/KanR: 193~987
Ori: 1,312~1,900
CMV enhancer: 2,001~2,380
CMV promoter: 2,381~2,584
 
T7 promoter sequence: 2,629~2,645
Transcription Start Sequence (AGG): 2,646~2,648
5’UTR: 2,649~2,699
FLuc CDS: 2,700~4,352
3’UTR: 4,353~4,465
Poly(A)105: 4,466~4,570 (FLuc Control Fragment-derived sequence: 2,685~4,367)
 
Linearized site by Hind III (5' overhangs) : 4,569 (4,573)
 
<T7启动子后序列的详细信息>
 
 

页面更新:2022-09-28 14:03:20

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