*红字为促销价格,促销时间: 2024年9月1日-2024年11月30日
一款合成高质量、高产量mRNA的体外转录(IVT)试剂盒 ·通过体外转录(IVT)合成带有Cap结构和Poly(A)序列的mRNA;※ Cap类似物不包含在本产品中 ·优化的T7 RNA聚合酶用于IVT反应,RNA合成效率高、产量大; ·独立包装的NTPs,方便修饰NTPs替换,且不影响mRNA产量; ·采用In-Fusion无缝克隆,轻松构建模板质粒DNA; ·使用氯化锂(LiCl)溶液进行RNA纯化,可立即进行下游应用。 |
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■ 制品说明 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System是能够简便、高效合成带有Cap结构和Poly(A)序列的mRNA的体外转录试剂盒。它包含以下两种制品: |
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① Cloning Kit for mRNA Template(Code No. 6143): 本试剂盒用于将模板DNA无缝克隆到预线性化载体(包含在本试剂盒中)中构建用于体外转录反应的模板质粒。预线性化载体中包含T7 启动子、转录起始序列 (AGG)、5'-UTR(非编码区)、3'-UTR、和105-base Poly(A) 序列。试剂盒还包含用于将目标DNA无缝克隆到预线性化载体的In-Fusion Snap Assembly Master Mix和FLuc对照片段(包括15 bp,3' In-Fusion sequence;FLuc CDS;和15 bp,5' In-Fusion sequence)。 |
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② Takara IVTpro T7 mRNA Synthesis Kit(Code No. 6144): 本试剂盒以含有 T7 启动子序列的双链 DNA 为模板,使用优化的高效T7 RNA聚合酶,通过体外转录可合成大量mRNA。除此以外,还包含用于IVT反应后消化模板DNA的DNase I和用于纯化mRNA的氯化锂 (LiCl) 溶液。真核细胞翻译蛋白质需要RNA的5'端有Cap结构,本试剂盒配合使用CleanCap Reagent AG(TriLink公司的Cap类似物)可以高效制备具有Cap结构的mRNA。另外,试剂盒包含单独的NTPs,方便优化或使用修饰NTPs如假尿苷替换,而且不会明显降低mRNA的产量。使用本产品,每次反应(20 μl 反应体系)可以合成高达 200μg 或更多的RNA。可以根据需要放大反应体系,即使使用10倍(200μl)反应体系也不影响mRNA预期产量(请参考说明书实验例)。※Cap类似物不包含在本产品中,请另外准备CleanCap Reagent AG (TriLink公司)。 |
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使用Takara IVTpro™ 系统合成 mRNA时,通过In-Fusion方法克隆目标基因(GOI)后,使用不会在 Poly (A) 下游留下额外序列的限制性内切酶切割是非常重要的。强烈建议使用 Hind III(Code No. 1060A/B)对用于mRNA合成的质粒进行线性化(请参考说明书和载体图谱信息)。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
■ 用途 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
· 用于体外转录(IVT)模板质粒DNA的构建 · 配合使用TriLink公司的CleanCap Reagent AG体外转录合成mRNA · 使用其它Cap类似物如Anti-Reverse Cap Analog (ARCA)合成带帽结构的mRNA (* 请注意,使用ARCA时,需要设计与本产品不同的模板序列。) · 用于长链非编码RNA(Long non-coding RNA)的合成 · 向导RNA(guide RNA)的合成 · siRNA前体的合成 · 用于RT-qPCR的RNA标准模板的合成 · RNA探针的合成 |
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■ 制品内容(6141、6144 ) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
Cloning Kit for mRNA Template(Code No. 6143)(10次反应) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
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*1:由 In-Fusion 序列 (15 bp) + FLuc-CDS + In-Fusion 序列 (15 bp) 组成的对照片段 (1,683 bp) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
Takara IVTpro T7 mRNA Synthesis Kit(Code No. 6144)(20次量、20 μl反应体系) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
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*2:由T7 启动子 + 5'UTR + FLuc-CDS + 3'UTR + Poly (A) 序列组成的线性质粒DNA。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
■ 实验操作注意事项 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
· 本制品是通过IVT反应合成RNA的试剂。如果双链DNA模板、试剂、试管、微量移液器吸头或反应中使用的其他材料混入RNase污染,会导致使用本试剂盒获得的RNA收量降低或片段化。在反应中使用专用试管和微量移液器吸头,并戴上新的一次性手套以防止RNase污染。 · 10X Enzyme Mix 不要剧烈搅拌。 · 使用前将Lithium Chloride Precipitation Solution在室温下融化。融解后,如果充分混合后仍可见沉淀,可37℃保温溶解。如果仍有沉淀物,请直接使用,对性能没有影响。 |
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■ 保存 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
-20℃ |
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■ 试剂盒以外的其它必要试剂(主要试剂) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
· CleanCap Reagent AG(TriLink公司) · 修饰NTPs · 限制酶(Hind III等等) |
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■ 序列信息 FLuc Control Fragment | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
序列信息(fasta格式):点此进行下载 |
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该序列与Positive Control Template(FLuc)中2,685~4,367(1,683 bp)的序列相同。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
■ 序列信息 Linearized Template Vector | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
序列信息(fasta格式):点此进行下载 |
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Linearized Template Vector(2,921 bp) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
NeoR/KanR: 53~847 Ori: 1,172~1,760 CMV enhancer: 1,861~2,240 CMV promoter: 2,241~2,444 |
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T7 promoter sequence: 2,489~2,505 Transcription start sequence (AGG): 2,506~2,508 5’UTR: 2,509~2,559 Upstream In-Fusion region (15 bp): 2,545~2,559 |
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In-Fusion cloning site (linearized site): between 2,559 and 2,560 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
Downstream In-Fusion region (15 bp): 2,560~2,574 3’UTR: 2,560~2,672 Poly(A)105: 2,673~2,777 Restriction enzyme sites for plasmid linearization: 2,776~2,801(Hind III, Xho I, Sal I, Avr II, BamH I) |
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Poly(A) Forward Primer: 2,570~2,589 Poly(A) Reverse Primer: 2,863~2,882 |
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<T7启动子后序列的详细信息> | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
■ 载体信息 Positive Control Template(FLuc) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
序列信息(fasta格式):点此进行下载 |
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Positive Control Template(FLuc)(4,574 bp) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
NeoR/KanR: 193~987 Ori: 1,312~1,900 CMV enhancer: 2,001~2,380 CMV promoter: 2,381~2,584 |
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T7 promoter sequence: 2,629~2,645 Transcription Start Sequence (AGG): 2,646~2,648 5’UTR: 2,649~2,699 FLuc CDS: 2,700~4,352 3’UTR: 4,353~4,465 Poly(A)105: 4,466~4,570 (FLuc Control Fragment-derived sequence: 2,685~4,367) |
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Linearized site by Hind III (5' overhangs) : 4,569 (4,573) |
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<T7启动子后序列的详细信息> |
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页面更新:2024-01-25 14:29:42