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人iPS细胞培养
 
人诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs) 由体细胞去分化重编程获得,具备与胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ESCs)相似的多向分化潜能和自我更新能力,同时可完全保留供体(疾病、健康)的遗传背景。iPS细胞避开了胚胎干细胞可能面临的伦理道德方面的“牵绊”,加上有诺贝尔生理学或医学奖光环的“加持”,深受科研和医疗领域研究者的“青睐”。人iPS细胞结合基因编辑技术,可以制备出各种各样组织类型的、具有患者特异性或疾病特异性的人体细胞,作为体外细胞模型应用于疾病发病机制研究和药物研发筛选等工作,即“iPS derived disease model in a dish”。

传统的人iPS细胞(和人ESCs)培养呈现集落状生长,需要操作人员具备一定的实验技巧和熟练程度,特别是在传代培养时,如果分离接种的集落太大,容易出现分化,集落太小,又容易出现死亡。而且在基因编辑等操作后,为了分离和筛选感兴趣的基因型,单细胞必须被分离并扩增为克隆细胞系,但是对于集落状生长的iPS细胞,一旦涉及单细胞相关的分离和操作,其细胞活力和多能性都面临巨大挑战。

Takara提供新型的DEF-CS培养系统(Y30010),支持人iPS细胞(和人ESCs)在无血清、无饲养层条件下培养,可以实现稳健增殖并维持良好的干细胞多能性。区别于传统的培养方法,All-In-One型的DEF-CS系统支持新型的非集落状生长,可以轻松进行单细胞传代,干细胞培养小白也可以很快上手,更重要的是DEF-CS培养系统可以有效支持单个iPS细胞的存活和扩增,规避了集落状培养带来的挑战和困难(Asplund et al. 2016)。Takara同时开发了单克隆版本的DEF-CS培养系统(Y30021),可以更好的支持基因编辑等操作后人iPS细胞单克隆的形成和扩增。

 
Code No. 产品名称 包装量
Y30010 Cellartis® DEF-CS™ 500 Culture System 1 Kit
Y30021 Cellartis® iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS™ Culture Media Kit 1 Kit
 
Takara提供适合于更多应用场景的DEF-CS培养系统,包括无异源物质(Xeno-free)级别版本(Y30045)、3D培养版本(Y30047)、GMP培养版本(Y30071),可以支持人iPS细胞从基础培养阶段向工业化开发和临床应用阶段过渡。
Code No. 产品名称 包装量
Y30045 Cellartis® DEF-CS™ 500 Xeno-Free Culture Medium w/o antibiotics 1 Kit
Y30047 Cellartis® DEF-CS™ 500 Xeno-Free 3D Spheroid Culture Medium 1 Kit
Y30071 Cellartis® DEF-CS™ 500 Xeno-Free GMP Grade Basal Medium (Prototype) 500 ml
 
人iPS细胞培养相关学习资料如下,不断更新中,欢迎随时查看或下载!
1. 技术资料(Technical notes)
· Using the DEF-CS system to culture human iPS cells
说明:新型的人iPS细胞生长模式,单层非集落、高度同质化。
 
· Direct comparison of the Cellartis DEF-CS system with different vendors' systems for culturing human pluripotent stem cells
说明:几大培养系统性能比对,Takara DEF-CS系统优势明显。
 
· Single-cell cloning of hiPS cells
说明:攻克难关,Takara DEF-CS系统应用于iPS细胞单克隆构建。
 
· Reprogramming of human PBMCs using Sendai virus and the Cellartis DEF-CS 500 Culture System
说明:高成功率,Takara DEF-CS系统应用于外周血单核细胞(PBMCs)重编程。
 
· Reprogramming of human fibroblasts using Sendai virus and the Cellartis DEF-CS 500 Culture System
说明:高成功率,Takara DEF-CS系统应用于成纤维细胞重编程。
 
· Gene editing in hiPS cells by using electroporation or gesicle technology
说明:完整解决方案,Takara DEF-CS系统应用于iPS细胞基因编辑。
 
2. 实验方案(Protocols)
· Cellartis DEF-CS Culture System User Manual
说明:详细使用手册,教你使用Takara DEF-CS系统进行人iPS细胞培养(复苏、换液、传代、冻存)。
 
· Transferring iPSCs from other feeder-free culture systems to the DEF-CS culture system
说明:内含小技巧,来自其他无饲养层法培养的iPS细胞也可以成功适应新型的Takara DEF-CS系统。
 
· Transferring iPSCs on MEFs to the DEF-CS culture system
说明:内含小技巧,来自饲养层法培养的iPS细胞也可以成功适应新型的Takara DEF-CS系统。
 
· Confirmation of pluripotency by spin embryoid body formation
说明:教你一招,利用拟胚体法鉴定干细胞多能性。
 
· Reprogramming fibroblasts using the Cellartis DEF-CS 500 Culture System
说明:步骤详解,利用仙台病毒重编程成纤维细胞。
 
· Reprogramming peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) using the Cellartis DEF-CS 500 Culture System
说明:步骤详解,利用仙台病毒重编程外周血单核细胞(PBMCs)。
 
· Video protocol: Culturing & editing human iPSCs with CRISPR/Cas9 and single-cell cloning
说明:视频演示,看看Takara如何进行人iPS细胞培养和(电穿孔法)基因编辑实验。
 
3. 讲座音频(Webinars)
· Edited hiPS cell lines for disease modeling
说明:主讲人Montse Morell博士,人iPS细胞创建疾病模型的挑战及解决方案。
 
4. 常见问答(FAQs)
· Cellartis DEF-CS 500 Culture System FAQs
说明:Takara DEF-CS培养系统答疑时间,产品相关6个+操作相关6个。
 
5. 文献案例(Citations)
· Cellartis DEF-CS 500 Culture System citation list
说明:Takara DEF-CS培养系统发表文献集合,涉及基础、转化、临床前、生物医药等研究领域。
 
6. 学术海报(Posters)
· Footprint-free gene editing using CRISPR/Cas9 and single-cell cloning of edited human iPS cells
说明:完整工作流程,低脱靶效应的人iPS细胞基因编辑和编辑后单细胞克隆培养。
 
延伸阅读:
1. 单个干细胞基因操作实验的理想选择
2. 科研版“PPAP”:iPSC基因编辑
3. #围观# 平平无奇的“人iPS细胞-疾病模型”制备小天才!
4. 人iPS细胞基因编辑解决方案
5. 人iPS细胞应用于疾病模型研究解决方案