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快速、高灵敏度的qPCR新冠病毒检测解决方案
 
2020年,新冠肺炎疫情在全球快速蔓延,准确地对新冠病毒进行检出至关重要。通过qPCR方法进行核酸检测,是判断是否携带病毒、是否具有传染性的“金标准”。
Takara作为众多检测试剂盒生产厂商的长期合作伙伴,能够提供【探针/引物合成 +核酸提取 + qPCR试剂 + 防污染措施】在内的完整的qPCR检测解决方案。
尤其是Takara探针法One Step RT-qPCR家族,以第三方认可的高灵敏度、小于20分钟的快速qPCR反应、无需RNA提取的直接qPCR技术,获得了全球科研人员的青睐。
 

Takara探针法One Step RT-qPCR家族,
检测灵敏度和速度

 
20分钟检测成为可能——方便的预混型试剂One Step PrimeScript™ III RT-qPCR Mix (or with UNG)(Code No. RR600/601)
· 预混型试剂,仅需添加引物、探针、模板,操作简单,降低污染风险。
· 使用新型的 PrimeScript III 反转录酶,高特异性、高延伸性、高耐热性(55℃)。
· 20分钟检测,甚至更快
√ 2020年11月,英国科学家在《Nature》旗下《Scientific Reports》期刊发表文章《CoV2-ID, a MIQE-compliant sub-20-min 5-plex RT-PCR assay targeting SARS-CoV-2 for the diagnosis of COVID-19》,文中使用了RR600进行了快速protocol的优化,【1分钟反转录+1秒变性+1秒退火/延伸】的反应设置,整体反应时间控制在20分钟以内,并在多种仪器上都显示了良好的结果,并有潜力实现更短时间的检测。
· 第三方评测的高灵敏度
2020年4月17日,英国科学家在bioRxiv预印本平台发表文献《Comparison of SARS-CoV2 N gene real-time RT-PCR targets and commercially available mastermixes》。作者比较了四种主流的RT-qPCR试剂对于新冠病毒的检测能力,结果显示:在最低检出界限方面,Takara One Step PrimeScript™ III RT-qPCR Mix(Code No. RR600)表现最为出色。
 
文献详细解读请参考新闻:第三方评测: 新冠病毒检测,Takara qPCR试剂表现出色
 
经典产品,被大量检测机构选择——One Step PrimeScript™ RT-PCR Kit (Perfect Real Time)(Code No. RR064A)
· 反转录、qPCR在同一管中连续进行的一步(One Step)法试剂,操作简单,并能有效防止污染。
· 疫情初期,中国疾病预防控制中心等权威机构发布了鉴定新型冠状病毒的文献《A Novel Coronavirus from Patients with Pneumonia in China, 2019》,文章中使用了该产品进行新冠病毒的qPCR检测。
· Takara实验例,同其他公司制品相比,可在短时间内完成qPCR分析,RR064可在41分钟内完成解析。
· 经客户优化反应体系和反应条件,新冠病毒qPCR检测可在30分钟内完成。
 
无需RNA纯化,先进的直接qPCR技术——PrimeDirect® Probe RT-qPCR Mix (or with UNG)(Code No.RR650/651)
· 无需RNA提取,血液、尿液等样品可直接加入到反应液中进行qPCR检测。
· 在新冠肺炎疫情下,无需RNA提取即可进行新冠病毒核酸检测,可以大大缓解人力、时间等压力。
· 2020年8月,德国科学家在《Journal of Clinical Virology》发表了题为《Extraction-free SARS-CoV-2 detection by rapid RT-qPCR universal for all primary respiratory materials》的文献,文章中作者以PrimeDirect Probe RT-qPCR Mix(Code No.RR650)为基础,研发了无需RNA提取、直接进行新冠病毒qPCR检测的方法。
· 杜塞尔多夫医院目前正在使用这种检测方法,在与感染患者接触的医生和工作人员中频繁地筛查COVID-19,这对于防止感染的局部传播至关重要。
 
 
 
·文献详细解读请参考新闻:无需RNA纯化,生物样本直接qPCR—新冠病毒检测
 
疫情初期,Takara除了快速反应为广大检测机构和公司提供了大量检测原料外, Takara还研讨了使用上述产品对新冠病毒进行检测的结果,验证了检测灵敏度、扩增情况、多重PCR的实验条件等内容。检测结果请参考新闻:
Takara有担当:提供完善的新冠病毒检测体系和研讨数据
 
新冠疫情爆发以来,已经有上千篇新冠病毒研究的文献中使用了Takara产品,其中,有50余篇发表在影响因子大于30的高水平期刊上。涉及到定量PCR、核酸提取、引物探针、序列调取、病毒滴度测定、表达系统等多个产品线。其中,使用Takara qPCR产品的文献数量约占1/3。相关信息请参考新闻:
万篇文献供参考,Takara是您值得信赖的科研伙伴
 
Takara为您提供新冠病毒检测完整解决方案
产品 Code No. 包装量 用途
DNA-OFF® 9036 500 ml 去除实验区域DNA污染
RNase-OFF® 9037 500 ml 去除RNase污染
TaKaRa MiniBEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver.5.0 9766 50 次 柱式法病毒核酸提取
RNAiso Plus 9108/9109 100/200 ml 试剂型Total RNA提取
One Step PrimeScript RT-PCR Kit (Perfect Real Time) RR064A/B 100/500 次 (50 μl反应) probe法One Step RT-qPCR
PrimeDirect® Probe RT-qPCR Mix RR650A/B 200/1,000 次(25 μl反应) 无需RNA纯化,直接进行probe法One Step RT-qPCR
PrimeDirect® Probe RT-qPCR Mix, with UNG RR651A/B 200/1,000 次(25 μl反应) RR650的UNG版本,防止假阳性
One Step PrimeScript III RT-qPCR Mix RR600A/B 200/1,000 次(25 μl反应) 完全premix型probe法One Step RT-qPCR
One Step PrimeScript III RT-qPCR Mix, with UNG RR601A/B 200/1,000 次(25 μl反应) RR600的UNG版本,防止假阳性
Uracil DNA Glycosylase (UNG), heat-labile 2820 200 U 防止Carryover污染导致的假阳性
dU plus dNTP Mixture (12.5×) 4035 800 μl 防止Carryover污染导致的假阳性
dNTP Mixture 4030 各3.2 μmol/1.28 ml PCR底物
dNTP Mixture 4019 各2.5 μmol/250 μl PCR底物
Reverse Transcriptase M-MLV (RNase H-) 2641A/B 10,000/40,000 U 反转录酶
Recombinant RNase Inhibitor 2313A/B 5,000/25,000 U RNase抑制剂
T7 RNA Polymerase 2540A/B 5,000 U/25,000 U RNA标准品的体外转录
RNase-free Water 9012 1 ml×10 支 RNA实验用水
 
除上述目录产品外,Takara不断完善病毒检测方案,提供WHO、中国疾病预防控制中心公布指导的引物探针套装、美国疾病控制与预防中心公布指导的引物探针套装。
同时,引物探针套装中还增加了所有检测靶点Control RNA产品。
 
一、新型冠状病毒(2019-nCoV)ORF1ab基因、E蛋白基因、N蛋白基因检测套装:
序号 Primer/Probe名称* 碱基序列 (方向为5' to 3')* 5'修饰 3'修饰 Control RNA**
01 2019-nCoV RdRP_SARSr-F2 GTG ARA TGG TCA TGT GTG GCG G     Ger-RdRP
02 2019-nCoV RdRP_SARSr-R1 CAR ATG TTA AAS ACA CTA TTA GCA TA    
03 2019-nCoV RdRP_SARSr-P2 CAG GTG GAA CCT CAT CAG GAG ATG C FAM BHQ-1
04 2019-nCoV RdRP_SARSr-P1 CCA GGT GGW ACR TCA TCM GGT GAT GC FAM BHQ-1
05 2019-nCoV E_Sardeco-F1 ACA GGT ACG TTA ATA GTT AAT AGC GT     Ger-E
06 2019-nCoV E_Sardeco-R2 ATA TTG CAG CAG TAC GCA CAC A    
07 2019-nCoV E_Sardeco-P1 ACA CTA GCC ATC CTT ACT GCG CTT CG FAM BHQ-1
08 2019-nCoV N_Sarbeco_F1 CAC ATT GGC ACC CGC AAT C     Ger-N
09 2019-nCoV N_Sarbeco_R1 GAG GAA CGA GAA GAG GCT TG    
10 2019-nCoV N_Sarbeco_P1 ACT TCC TCA AGG AAC AAC ATT GCC A FAM BHQ-1
 
二、新型冠状病毒(2019-nCoV)ORF1ab/N基因检测套装:
序号 Primer/Probe名称* 碱基序列 (方向为5' to 3')* 5'修饰 3'修饰 Control RNA**
11 2019-nCoV nsp14F TGG GGY TTT ACR GGT AAC CT     HK-ab1
12 2019-nCoV nsp14R AAC RCG CTT AAC AAA GCA CTC    
13 2019-nCoV nsp14P TAG TTG TGA TGC WAT CAT GAC TAG FAM TAMRA
14 2019-nCoV NF TAA TCA GAC AAG GAA CTG ATT A     HK-N
15 2019-nCoV NR CGA AGG TGT GAC TTC CAT G    
16 2019-nCoV NP GCA AAT TGT GCA ATT TGC GG FAM TAMRA
 
根据中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所公布指导,Takara提供一个qPCR引物探针套装:
序号 Primer/Probe名称* 碱基序列 (方向为5' to 3')* 5'修饰 3'修饰 Control RNA**
17 CDC 2019-nCoV ORF1ab-F CCCTGTGGGTTTTACACTTAA     CDC-ORF1ab
18 CDC 2019-nCoV ORF1ab-R ACGATTGTGCATCAGCTGA    
19 CDC 2019-nCoV ORF1ab-P CCGTCTGCGGTATGTGGAAAGGTTATGG FAM BHQ-1
20 CDC 2019-nCoV N-F GGGGAACTTCTCCTGCTAGAAT     CDC-N
21 CDC 2019-nCoV N-R CAGACATTTTGCTCTCAAGCTG    
22 CDC 2019-nCoV N-P TTGCTGCTGCTTGACAGATT FAM TAMRA
 
根据美国疾病控制与预防中心公布指导,Takara提供一个qPCR引物探针套装:
序号 Primer/Probe名称* 碱基序列 (方向为5' to 3')* 5'修饰 3'修饰 Control RNA**
23 US CDC 2019-nCoV_N1-F GACCCCAAAATCAGCGAAAT     US-N1
24 US CDC 2019-nCoV_N1-R TCTGGTTACTGCCAGTTGAATCTG    
25 US CDC 2019-nCoV_N1-P ACCCCGCATTACGTTTGGTGGACC FAM BHQ-1
26 US CDC 2019-nCoV_N2-F TTACAAACATTGGCCGCAAA     US-N2
27 US CDC 2019-nCoV_N2-R GCGCGACATTCCGAAGAA    
28 US CDC 2019-nCoV_N2-P ACAATTTGCCCCCAGCGCTTCAG FAM BHQ-1
29 US CDC 2019-nCoV_N3-F GGGAGCCTTGAATACACCAAAA     US-N3
30 US CDC 2019-nCoV_N3-R TGTAGCACGATTGCAGCATTG    
31 US CDC 2019-nCoV_N3-P AYCACATTGGCACCCGCAATCCTG FAM BHQ-1
32 US CDC RP-F(内参检测用) AGATTTGGACCTGCGAGCG      
33 US CDC RP-R(内参检测用) GAGCGGCTGTCTCCACAAGT    
34 US CDC RP-P(内参检测用) TTCTGACCTGAAGGCTCTGCGCG FAM BHQ-1
*所有引物探针为HPLC纯化级别,客户可以根据需要选择合适的套装。
**Control RNA产品需单独订购,订购时请咨询各地代理商。
 
Takara还可以提供使用简便、性价比高、可靠的Real Time PCR仪Thermal Cycler Dice Real Time System III (Code No. TP950)。 除具有以往Takara PCR仪受到好评的友好操作软件外,还搭载触摸屏控制面板,可进行单机 (独立) 操作,以追求操作简便性。
 
 
特点介绍:
◇ 搭载触摸屏,可独立操作,支持英语/日语界面,仪器软件更加追求操作简便性。
◇ 可做高速定量PCR反应。
使用嵌合荧光染料检测法时,与试剂TB Green Fast qPCR Mix(Code No. RR430)搭配使用,TP950可完成快速定量PCR反应。
◇ 专为科研用户设计的便于操作的定量软件。