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当前位置:首页> 机构用户解决方案 > 新冠病毒解决方案 > 新冠病毒qPCR检测 > 一步法RT-qPCR快速筛查新冠病毒

与疫情赛跑,一步法RT-qPCR快速筛查新冠病毒

 
多人死亡,往返中国的航班取消,潜在接触者被隔离,促使世界卫生组织(WHO)宣布新型冠状病毒(2019-nCoV)疫情被划入“国际关注的突发公共卫生事件”(PHEIC)。截至2020年2月10日,2019-nCoV引发的呼吸道疾病已导致全球1000余人死亡,4万余人确诊患病。
 
冠状病毒是一类能引起上呼吸道和下呼吸道疾病的病毒,具有类似太阳冠冕的特征性尖刺外观。许多常见的冠状病毒通常会导致轻度到中度的症状,但有些病毒会导致严重的症状,并可能发展为致命的肺炎,比如在2003年爆发的SARS-CoV 和2015年的MERS-CoV。由于2019-nCoV引发的肺炎导致多人死亡,且可能潜在的无症状个体传播,因此,对该病毒进行有效的实验室筛查对控制此次疫情至关重要。
 
2020年1月24日,中国疾病预防控制中心等权威机构发布了鉴定2019-nCoV的文献《A Novel Coronavirus from Patients with Pneumonia in China, 2019》。文章中,作者开发了一种病毒筛选方法,通过RNA-Seq技术获得了特异性病毒序列,对2019-nCoV进行测序和分类,还使用光镜和透射电镜观察了2019-nCoV感染的人呼吸道上皮细胞中培养物的病毒颗粒和细胞病变效应。这其中使用了Takara探针法One Step PrimeScript RT-PCR Kit (Perfect Real Time)(Code No. RR064)
 
中国科学院武汉病毒研究所发表的文章《Discovery of a novel coronavirus associated with the recent pneumonia outbreak in humans and its potential bat origin》,已经鉴定出该病毒在整个基因组水平上与蝙蝠冠状病毒96%相同,对7种保守的非结构蛋白的成对序列分析表明,该病毒属于SARSr-CoV。重要的是,他们证实2019-nCoV使用了与SARS冠状病毒相同的细胞进入受体ACE2。该团队使用了Takara的SMARTer RACE 5'/3' Kit(Code No. 634858) 用于确定病毒基因组的5'末端序列。
 
另一个研究小组(Letko和Munster 2020)利用Takara高效率无缝克隆技术In-Fusion HD Cloning Kit(Code No. 639648)克隆了该病毒的刺突编码序列,研究了2019-nCoV的细胞进入机制。
 
类似的方法已经被许多组织用来识别这种特殊病毒的其他部分。中国疾病预防控制中心推荐了One Step PrimeScript RT-PCR Kit (Perfect Real Time)(Code No. RR064)用于2019-nCoV的检测,并已经在中国各地被广泛使用。世界卫生组织(WHO)和疾病预防控制中心(CDC)已经开发出类似的方法,随着更多病例的报道,WHO将对病毒检测方法提出更多建议。
 
我们正迅速行动,以满足中国以及其他国家不断增加的2019-nCoV筛查需求。
Takara 愿以高质量的产品和热忱的服务,为2019-nCoV筛查贡献绵薄之力。
 
山川异域,风月同天。守望相助,众志成城。
 
Takara提供2019-nCoV筛查完整解决方案
产品 Code No. 包装量 用途
DNA-OFF® 9036 500 ml 去除实验区域DNA污染
RNase-OFF® 9037 500 ml 去除RNase污染
TaKaRa MiniBEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver.5.0 9766 50 次 柱式法病毒核酸提取
RNAiso Plus 9108/9109 100/200 ml 试剂型Total RNA提取
One Step PrimeScript RT-PCR Kit (Perfect Real Time) RR064A/B 100/500 次 (50 μl反应) probe法One Step RT-qPCR
PrimeDirect® Probe RT-qPCR Mix RR650A/B 200/1,000 次(25 μl反应) 无需RNA纯化,直接进行probe法One Step RT-qPCR
PrimeDirect® Probe RT-qPCR Mix, with UNG RR651A/B 200/1,000 次(25 μl反应) RR650的UNG版本,防止假阳性
One Step PrimeScript III RT-qPCR Mix RR600A/B 200/1,000 次(25 μl反应) 完全premix型probe法One Step RT-qPCR
One Step PrimeScript III RT-qPCR Mix, with UNG RR601A/B 200/1,000 次(25 μl反应) RR600的UNG版本,防止假阳性
Uracil DNA Glycosylase (UNG), heat-labile 2820 200 U 防止Carryover污染导致的假阳性
dU plus dNTP Mixture (12.5×) 4035 800 μl 防止Carryover污染导致的假阳性
dNTP Mixture 4030 各3.2 μmol/1.28 ml PCR底物
dNTP Mixture 4019 各2.5 μmol/250 μl PCR底物
Reverse Transcriptase M-MLV (RNase H-) 2641A/B 10,000/40,000 U 反转录酶
Recombinant RNase Inhibitor 2313A/B 5,000/25,000 U RNase抑制剂
T7 RNA Polymerase 2540A/B 5,000 U/25,000 U RNA标准品的体外转录
RNase-free Water 9012 1 ml×10 支 RNA实验用水
 
除上述目录产品外,Takara不断完善病毒检测方案,提供WHO、中国疾病预防控制中心公布指导的引物探针套装、美国疾病控制与预防中心公布指导的引物探针套装。
同时,引物探针套装中还增加了所有检测靶点Control RNA产品。
 
一、新型冠状病毒(2019-nCoV)ORF1ab基因、E蛋白基因、N蛋白基因检测套装:
序号 Primer/Probe名称* 碱基序列 (方向为5' to 3')* 5'修饰 3'修饰 Control RNA**
01 2019-nCoV RdRP_SARSr-F2 GTG ARA TGG TCA TGT GTG GCG G     Ger-RdRP
02 2019-nCoV RdRP_SARSr-R1 CAR ATG TTA AAS ACA CTA TTA GCA TA    
03 2019-nCoV RdRP_SARSr-P2 CAG GTG GAA CCT CAT CAG GAG ATG C FAM BHQ-1
04 2019-nCoV RdRP_SARSr-P1 CCA GGT GGW ACR TCA TCM GGT GAT GC FAM BHQ-1
05 2019-nCoV E_Sardeco-F1 ACA GGT ACG TTA ATA GTT AAT AGC GT     Ger-E
06 2019-nCoV E_Sardeco-R2 ATA TTG CAG CAG TAC GCA CAC A    
07 2019-nCoV E_Sardeco-P1 ACA CTA GCC ATC CTT ACT GCG CTT CG FAM BHQ-1
08 2019-nCoV N_Sarbeco_F1 CAC ATT GGC ACC CGC AAT C     Ger-N
09 2019-nCoV N_Sarbeco_R1 GAG GAA CGA GAA GAG GCT TG    
10 2019-nCoV N_Sarbeco_P1 ACT TCC TCA AGG AAC AAC ATT GCC A FAM BHQ-1
 
二、新型冠状病毒(2019-nCoV)ORF1ab/N基因检测套装:
序号 Primer/Probe名称* 碱基序列 (方向为5' to 3')* 5'修饰 3'修饰 Control RNA**
11 2019-nCoV nsp14F TGG GGY TTT ACR GGT AAC CT     HK-ab1
12 2019-nCoV nsp14R AAC RCG CTT AAC AAA GCA CTC    
13 2019-nCoV nsp14P TAG TTG TGA TGC WAT CAT GAC TAG FAM TAMRA
14 2019-nCoV NF TAA TCA GAC AAG GAA CTG ATT A     HK-N
15 2019-nCoV NR CGA AGG TGT GAC TTC CAT G    
16 2019-nCoV NP GCA AAT TGT GCA ATT TGC GG FAM TAMRA
 
根据中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所公布指导,Takara提供一个qPCR引物探针套装:
序号 Primer/Probe名称* 碱基序列 (方向为5' to 3')* 5'修饰 3'修饰 Control RNA**
17 CDC 2019-nCoV ORF1ab-F CCCTGTGGGTTTTACACTTAA     CDC-ORF1ab
18 CDC 2019-nCoV ORF1ab-R ACGATTGTGCATCAGCTGA    
19 CDC 2019-nCoV ORF1ab-P CCGTCTGCGGTATGTGGAAAGGTTATGG FAM BHQ-1
20 CDC 2019-nCoV N-F GGGGAACTTCTCCTGCTAGAAT     CDC-N
21 CDC 2019-nCoV N-R CAGACATTTTGCTCTCAAGCTG    
22 CDC 2019-nCoV N-P TTGCTGCTGCTTGACAGATT FAM TAMRA
 
根据美国疾病控制与预防中心公布指导,Takara提供一个qPCR引物探针套装:
序号 Primer/Probe名称* 碱基序列 (方向为5' to 3')* 5'修饰 3'修饰 Control RNA**
23 US CDC 2019-nCoV_N1-F GACCCCAAAATCAGCGAAAT     US-N1
24 US CDC 2019-nCoV_N1-R TCTGGTTACTGCCAGTTGAATCTG    
25 US CDC 2019-nCoV_N1-P ACCCCGCATTACGTTTGGTGGACC FAM BHQ-1
26 US CDC 2019-nCoV_N2-F TTACAAACATTGGCCGCAAA     US-N2
27 US CDC 2019-nCoV_N2-R GCGCGACATTCCGAAGAA    
28 US CDC 2019-nCoV_N2-P ACAATTTGCCCCCAGCGCTTCAG FAM BHQ-1
29 US CDC 2019-nCoV_N3-F GGGAGCCTTGAATACACCAAAA     US-N3
30 US CDC 2019-nCoV_N3-R TGTAGCACGATTGCAGCATTG    
31 US CDC 2019-nCoV_N3-P AYCACATTGGCACCCGCAATCCTG FAM BHQ-1
32 US CDC RP-F(内参检测用) AGATTTGGACCTGCGAGCG      
33 US CDC RP-R(内参检测用) GAGCGGCTGTCTCCACAAGT    
34 US CDC RP-P(内参检测用) TTCTGACCTGAAGGCTCTGCGCG FAM BHQ-1
*所有引物探针为HPLC纯化级别,客户可以根据需要选择合适的套装。
**Control RNA产品需单独订购,订购时请咨询各地代理商。
 
Takara还可以提供使用简便、性价比高、可靠的Real Time PCR仪Thermal Cycler Dice Real Time System III (Code No. TP950)。 除具有以往Takara PCR仪受到好评的友好操作软件外,还搭载触摸屏控制面板,可进行单机 (独立) 操作,以追求操作简便性。
 
 
特点介绍:
◇ 搭载触摸屏,可独立操作,支持英语/日语界面,仪器软件更加追求操作简便性。
◇ 可做高速定量PCR反应。
使用嵌合荧光染料检测法时,与试剂TB Green Fast qPCR Mix(Code No. RR430)搭配使用,TP950可完成快速定量PCR反应。
◇ 专为科研用户设计的便于操作的定量软件。