| ■ SmartChip Real-Time PCR System概况 |
| |
| Real-Time PCR（qPCR）是应用于基因分型研究和基因表达分析的一个强大工具。 |
| |
| 当前，各种qPCR实验变得越来越复杂。实验中，检测目标数量、样本数量不断增加，同时要求更多的技术重复。因此，在不降低灵敏度、特异性和重复性等前提下，qPCR实验对高通量解决方案的需求正在与日俱增。 |
| |
| 凭借丰富的qPCR创新试剂开发经验，Takara深知让复杂的实验适应高通量工作流程可能出现种种困难。SmartChip Real-Time PCR System是一个完整的高通量qPCR解决方案，为qPCR实验提供更高的检测通量和灵活的样品布局方式。 |
| |
 |
| |
| 工作流程 |
| |
| 高通量与灵活性的配合 |
| SmartChip Real-Time PCR System工作流程如图所示（图1）。SmartChip MyDesign Kit包含开展实验必要的微孔芯片，芯片表面设计有5,184个纳升体积反应孔。 |
| |
| SmartChip Real-Time PCR System由液体分注平台（MultiSample NanoDispenser，MSND）和热循环仪共同组成。液体分注平台是一个高精度、纳升体积的液体处理系统，能够在40分钟内对一张5,184微孔芯片完成一次液体分注。热循环仪可以在2小时内完成一整张芯片的反应及数据分析工作，支持基于探针法和染料法的实验方式和数据分析。系统分析软件单日即可完成超过10,000例样品的检测分析任务。 |
| |
 |
| 图1. SmartChip Real-Time PCR System实验流程 |
| |
| 灵活性 |
| |
| 灵活的操作方式，一致的检测结果 |
| SmartChip MyDesign Kit微孔芯片设计有5,184个独立的纳升微孔，让SmartChip System可以实现灵活的检测配置方案。检测引物与样品在微孔芯片上可以适配14种不同的布置方式。用户可以根据自己的实验需求进行布置设计，无需担心实验方案因通量问题不得不更改样本和引物数量。 |
| |
| 表1. SmartChip MyDesign Kit一张芯片上引物与样品数量配置方案 |
 |
| |
 |
| 图2. SmartChip MyDesign Kit 空白芯片展示 |
| |
| SmartChip Real-Time PCR System配置了芯片冷却台和湿度可控的封闭运行环境，为正确的检测结果提供了良好的温度均一性。在5,184微孔芯片中，对同一样本，同一检测引物进行重复检测。检测结果显示出良好的一致性，Ct值标准偏差（SD）<0.1。无需担心微孔在芯片上的位置不同，引起潜在数据波动。 |
| |
 |
| 图3. 热均一性带来了良好的检测结果。在一张芯片上进行的同一样品检测重复。结果Ct值范围在19.36-19.96，标准偏差（SD）＜0.1。 |
| |
| 微量反应体系——100-nl |
| |
| 反应效率与灵敏度兼得 |
| SmartChip Real-Time PCR System应用100-nl反应体系开展检测。与传统384孔板使用的25-μl反应体系相比，更节省实验成本。100-nl反应体系仅需3-10 ng/μl样品起始浓度，检测反应灵敏，更无需费时的预扩增步骤。 |
| |
 |
| 图4. 降低qPCR反应体积时试剂消耗情况对比 |
| |
| 基因表达应用 |
| |
| 高重复性基因表达分析，检测动态范围宽广 |
| 对目标序列进行准确、灵敏的检测是基因表达分析的关键。将λDNA稀释到不同浓度作为样品，图5展示了SmartChip Real-Time PCR System在大于6 logs线性动态范围下，对目标序列进行基因表达检测的表现，R2＞0.99，检测结果可信度高。 |
| |
 |
| 图5. 使用SmartChip系统进行基因表达检测，线性动态范围大于6 logs |
| |
| 对于高通量检测来说，无论开展时间、操作人员、重复次数如何变化，得到的检测数据一致可重复是十分必要的。使用SmartChip Real-Time PCR System，由3位使用者在3个不同日期开展同一基因表达检测实验，每位使用者完成2张微孔芯片的检测重复。图6检测结果显示，在不同使用者、不同开展日期、不同芯片等变化条件下，SmartChip系统均获得了一致可重复的检测结果。 |
| |
 |
| 图6. 不同芯片、使用者、实验时间获得的数据表现出良好的一致性 |
| |
| SmartChip Real-Time PCR System支持使用空白芯片进行引物与样品的自主分注，或使用引物预分注芯片进行样品分注两种不同的实验方式。两种方式不会对实验结果造成影响。使用梯度稀释样品进行基因表达分析，分别在SmartChip MyDesign Kit空白芯片和定制预分注芯片上完成。各组实验之间Ct值线性相关性很好（R2＞0.99），标准偏差（SD）＜0.1（图7）。使用SmartChip Real-Time PCR System既可以通过空白芯片进行各种基因表达分析，也可以通过预分注芯片完成基因筛选，无需重新验证。 |
| |
 |
| 图7. 使用空白芯片与预分注芯片实验结果重复性良好 |
| |
| 基因分型 |
| |
| 灵敏、正确、一致性的基因分型 |
| 基因分型实验中，检测的准确性、灵敏性是非常重要的。使用SmartChip系统进行基因分型实验，样品浓度选择1 ng/μl 和5 ng/μl 两个水平。1 ng/μl样品浓度条件下的基因分型实验，尽管结果的分型聚类簇看起来相对分散，但依然可以有效地完成分型（图8）。低至1 ng/μl的样品浓度，在SmartChip系统上依然可以收获良好的分型结果。 |
| |
 |
| 图8. 使用低起始样品浓度，基因分型检测依然良好 |
| |
| 与基因表达分析一样，SmartChip系统对基因分型检测同样支持空白芯片与引物预分注芯片两种不同的实验操作方式，并且结果数据一致性良好。选择5台SmartChip系统，使用空白芯片和引物预分注芯片两种操作方式，对同一基因分型实验进行重复。图9结果显示，两种操作方式均获得了高分型率，且与样品已知的结果高度一致。SmartChip Real-Time PCR System让您的实验拥有更多选择，收获正确、一致的结果。 |
| |
 |
| 图9. 5台SmartChip系统的结果分型图显示，无论空白芯片还是预分注芯片均表现出很好的鉴别率和一致性。 |
| |
| |
| |
京公网安备 110114000405号