· 完整的V(D)J序列信息—获得TCR mRNA转录本可变区的全长序列
· TCR-α和β链—同时或单独分析TCR两个亚基的多样性
· 无需多重PCR—每次反应利用一对引物扩增相应的TCR亚基
· Illumina-ready测序文库—无需接头连接即可添加Illumina接头和index序列
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SMARTer Mouse TCR a/b Profiling Kit 为那些寻求对T细胞受体(TCR)库进行NGS分析的研究者提供了一种强大的新的解决方案。试剂基于5’-RACE 方法可以捕获TCR转录本完整V(D)J 可变区,可以低至10 ng 至500 ng的来源于小鼠脾脏、胸腺或PBMCs的总RNA起始,也可以1,000 至 10,000个纯化的T细胞起始。顾名思义,本试剂可以在同一实验或单独实验中获得α和β链链多样性数据。
与采用多重PCR方法研究TCR多样性不同,每轮文库扩增只使用针对不同TCR亚基的一对引物扩增,提高了效率,减少了引物二聚体形成的可能性。基于多重PCR的分析方法,众所周知容易形成与引物相关的序列特异性偏差;这些偏差在我们基于RACE的方法中不会存在,因为所有的可变区都由相同的恒定区序列引发。采用本试剂~4 h即可构建indexed文库用于Illumina平台测序。
试剂采用了SMART (Switching Mechanism at 5’ End of RNA Template) 技术和LNA技术,可以无偏扩增TCR mRNA序列,并具有很高的灵敏度。 |
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