重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) | ||||||
品牌 | Code No. | 产品名称 | 包装量 | 价格(元) | 说明书 | 数量 |
Clontech | 632640 | Guide-it Recombinant Cas9 (3 μg/μ) | 3 × 100 μg | ¥7,767 | ||
Clontech | 632641 | Guide-it Recombinant Cas9 (3 μg/μ) | 100 μg | ¥3,065 |
Guide-it Recombinant Cas9 (Electroporation Ready)(Code No. 632641/632640)产品名称变更为Guide-it Recombinant Cas9 (3 μg/μl) ,产品内容没有发生变化。(2021年5月) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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降低脱靶效应,可用于in vivo基因编辑实验 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Guide-it™ Recombinant Cas9 (3 μg/μl) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
· 适用于电穿孔方法的低甘油含量、高浓度的Cas9蛋白质溶液 · 与质粒导入系统相比较,脱靶效应受到明显抑制 · NLS(核定位信号)有助于实现快速高效突变导入 · 与Guide-it Complete sgRNA Screening System组合使用实现高效率的基因编辑 |
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■ 产品说明: | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Guide-it Recombinant Cas9(3 μg/μl)是来源于野生型酿脓链球菌Streptococcus pyogenes,适用于CRISPR/Cas9基因编辑实验的重组Cas9蛋白质溶液。 高浓度Cas9蛋白质溶液中甘油浓度比其他公司低,特别适用于电穿孔导入方法。与借助质粒导入Cas9基因序列方法相比较,避免了残留Cas9基因的持续表达,有效抑制了脱靶效应。 无需经过蛋白质转录·翻译·表达过程,C末端的NLS(核定位信号)可以实现快速有效的突变导入。 Cas9导入细胞首先需要形成Cas9-sgRNA核糖核蛋白复合物,sgRNA制备推荐使用Guide-it sgRNA In VitroTranscription Kit(Code No. 632635)或者Guide-it Complete sgRNA Screening System(Code No. 632636)。 |
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■ 实验例: | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
图1. AAVS1或者CXCR4基因同源重组修复(HDR)效率 Guide-it Recombinant Cas9(3 μg/μl)和修复模板复合物通过电穿孔的方式导入至CD34+造血干细胞中检测同源重组修复(HDR)效率。将包含Hind III酶切位点的修复模板插入至AAVS1 基因中,包含Hind III和BamH I酶切位点的修复模板插入至CXCR4基因中。之后通过对细胞内靶基因进行PCR扩增和限制酶剪切分析,确认突变导入效率。基因编辑效率标注在凝胶阳性孔处。在基因编辑前野生型CXCR4基因已包含1处BamH I位点,因此BamH I剪切CXCR4基因后额外多显示一条条带。 |
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图2. 不同公司Cas9产品在hiPS細胞中基因敲除效率比较 剪切后电泳条带的强弱可以半定量估计发生基因编辑细胞的百分数。Guide-it Recombinant Cas9(3 μg/μl)与Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit制备的sgRNA相结合,通过电穿孔的方法导入Cellartis hiPSC-18细胞,采用Guide-it Mutation Detection Kit(Code No. 631448)确认突变导入效率,%即表示基因编辑效率。如图所示,Guide-it Recombinant Cas9(3 μg/μl)在多数靶基因位点均显示有效的基因编辑。 |
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* 比较结果来自于Takara Bio USA, Inc. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
■ 浓度 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
3 μg/μl | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
■ 保存 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
-70℃ (注意)避免反复冻融。首次溶解之后,建议按照使用量分装保存。 |
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■ 所需要的其它产品(主要产品) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
· 电穿孔装置: Neon Transfection System(Thermo Fisher Scientific)或者 4-D Nucleofector System(Lonza) *各装置的导入条件请阅读使用说明书。 · sgRNA制备及筛选 Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit(Code No. 632635):用于sgRNA制备及纯化 Guide-it Complete sgRNA Screening System(Code No. 632636):用于确认制备的sgRNA的有效性 |
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产品详情请点击: | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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页面更新:2021-07-20 09:32:43