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SMART-Seq HT Kit & SMART-Seq HT Plus Kit:自动化友好型的单细胞mRNA全长分析 | ||||||||||||||||||||
· 自动化友好型 - 兼容自动化工作站,更少的时间分析更多的样本 · 高灵敏度 - 可以从单细胞或10 pg总RNA起始(起始量:1-100个细胞或10 pg-1 ng总RNA) · 高质量的RNA-Seq数据 - 保留全长基因信息,低rRNA比率,高基因检出数,有效扩增GC-rich转录本 · 单管操作流程 - SMART-Seq HT PLUS Kit包含完整的cDNA合成和文库构建流程,分别在单管中进行,减少样品损失与混淆,降低手动操作误差 · 增强的测序性能 - SMART-Seq HT PLUS Kit整合双端特殊index(UDI),即便多个文库pool后用高通量型illumina测序仪(如Novaseq)分析,也能得到正确结果 · 更高的文库产量 - 更便于使用高通量型illumina测序仪测序(如Novaseq),或保存剩余的文库用于多次测序 |
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注意: SMART-Seq mRNA HT是SMART-Seq HT Kit的等效替代品,本次更新并不影响这些试剂盒的流程和性能。 | ||||||||||||||||||||
■ 产品说明 | ||||||||||||||||||||
SMART-Seq HT Kit(SS-HT)和SMART-Seq HT Plus Kit(SS-HT PLUS)均兼容自动化移液工作站,采用oligo(dT)引物,支持1-100个细胞或10 pg-1 ng总RNA起始。 SS-HT试剂盒是从第4代的SMARTer Ultra Low试剂(SMART-Seq v4)发展而来的,具有简化的操作流程,将原有的反转录和PCR扩增步骤整合为一步,且不影响性能。细胞分离或RNA提取后,仅通过一步RT-PCR扩增双链cDNA,然后进行纯化完成操作。cDNA合成可在4小时内完成,整个文库构建方案可在2天内完成。而且,SMART-Seq HT试剂盒具有与SMART-Seq v4试剂盒相同的灵敏度和可重复性。核心的SMART技术,是一种对全转录组研究,以及包括细胞内剪接位点,可变剪接研究的非常强大的工具,且可以检测全长基因。 Oligo(dT)可以从高品质总RNA(RIN> 8)或完整细胞中特异性扩增mRNA。 通过采用LNA技术,提升了模板转换的效率与基因检出数等性能。 SS-HT PLUS Kit在包含核心的cDNA合成试剂基础上,同时整合了Takara Bio Group专利性的文库构建技术(U.S. Patents 7,803,550, 8,399,199, 8,728,737, 9,598,727,10,196,686, 10,208,337, and 11,072,823)及单次使用的双端特殊index(UDI),提供完整的单细胞cDNA合成到文库构建的实验体验。建库试剂中包含片段化酶,以实现对合成cDNA的片段化,接着利用特别的茎环形接头构建高品质illumina文库。在建库阶段,单管两步操作、过程中无需纯化、2 h即可建成文库! |
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■ SS-HT Kit:流程缩短、性能不变! | ||||||||||||||||||||
图1 SMART-Seq HT的技术流程 | ||||||||||||||||||||
图2 SMART-Seq v4和SMART-Seq HT工作流程的比较 | ||||||||||||||||||||
SMART-Seq HT(右)是由SMART-Seq v4方法(左)经过改进而来的一个手动操作时间更短的高通量工作流程。使用FACS方法获得单细胞,SMART-Seq HT试剂盒只需3个操作步骤即可制备cDNA,而SMART-Seq v4试剂盒需要6步。SMART-Seq HT工作流程的一个重要步骤是一步RT-PCR,即使用一步RT-PCR缓冲液,进行高效的反转录和PCR扩增cDNA的过程。 | ||||||||||||||||||||
图3 使用SMART-seq v4 kit和SMART-Seq HT kit从FACS分选的293T细胞中获得的高重复性的基因表达数据 | ||||||||||||||||||||
使用SMART-Seq v4试剂盒(SSv4_1-SSv4_12)和SMART-Seq HT试剂盒( HT_1-HT_9)(上图)从21个293T细胞单细胞制备文库,并对每个细胞获得的基因表达性进行评估。层次聚类热图展示了所有细胞之间的Euclidean distances,并显示从0.74到0.97的Pearson相关性。不仅用相同试剂盒制备的细胞之间可以观察到非常高的相关性,而在两种试剂盒之间的相关性也非常高。这些数据表明,SMART-Seq HT的工作流程与SMART-Seq v4相比,在基因表达分析中没有显著的偏差。 | ||||||||||||||||||||
■ SS-HT PLUS Kit:不只是一个Kit,更是完整的单细胞RNA-Seq建库体验! | ||||||||||||||||||||
为了使单细胞cDNA合成、文库构建实验“一步”到位,我们全新推出了SS-HT PLUS Kit。 | ||||||||||||||||||||
从高灵敏度、高重复性的cDNA合成出发,构建更高品质illumina文库 | ||||||||||||||||||||
Takara科学家从10 pg小鼠脑total RNA起始,采用SMART-Seq HT Kit完成cDNA合成。随后分别使用SS-HT Plus Kit中的SMART-Seq Library Prep Kit模块与市面上较常用的A公司试剂盒构建文库,并比较性能差异。 | ||||||||||||||||||||
(比较数据来源于Takara Bio USA, Inc.) | ||||||||||||||||||||
从测试数据中可以看出,SS-HT PLUS Kit所建文库的产量是A公司Kit产量的5倍,而更高的文库产量更适于高通量型Illumina测序仪,如Novaseq。 | ||||||||||||||||||||
两种方法所建文库随后用Nextseq 500完成测序,并对TPM(Transcripts per million)≥0.1的基因数进行统计。SS-HT PLUS文库能比A公司文库多检出10%的基因,从同样的cDNA起始能“捕获”更全的信息! | ||||||||||||||||||||
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更多实验数据: | ||||||||||||||||||||
SS-HT Kit | ||||||||||||||||||||
SS-HT Plus Kit | ||||||||||||||||||||
延伸阅读: | ||||||||||||||||||||
单细胞NGS解决方案 | ||||||||||||||||||||
页面更新:2024-11-28 14:48:11