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Human iPS Cell Generation Vector Set
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara 3670 Human iPS Cell Generation Vector Set 各5 μg ¥9,012
 
■ 制品内容
pDON-5 OCT3/4 -SOX2 DNA (0.5 μg/μl) 10 μl
pDON-5 KLF4 DNA (0.5 μg/μl) 10 μl
pDON-5 LIN28-NANOG DNA (0.5 μg/μl) 10 μl
   
Limited Use Label License: [L44]
 
■ 制品说明
本制品是制备Human iPS细胞诱导用逆转录病毒所使用的Vector Set。在高效、高表达逆转录病毒载体pDON-5 DNA (Code No.: 3658) 上,分别插入了iPS细胞诱导用基因OCT3/4SOX2*KLF4LIN28NANOG*。各载体与Retrovirus Packaging Kit Ampho (Code No.: 6161) 中的pGP Vector以及pE-ampho Vector共转染至逆转录病毒制备用细胞G3T-hi (Code No.: 6163) 后,可以制备iPS诱导用逆转录病毒。如此制备的重组逆转录病毒由于和RetroNectin® (Recombinant Human Fibronectin Fragment)(Code No.: T100A/B) 有高亲和性,所以在向目的细胞中导入基因时,使用经RetroNectin®处理后的培养皿或平板,即使同时数个逆转录病毒共感染,也可以得到较高的基因导入率,可以有效提高iPS细胞的诱导效率。
* 两种基因被转录在同一个mRNA中,SOX2 (或者NANOG) 通过IRES介导,与OCT3/4 (或者LIN28) 独立翻译表达 (见质粒载体图谱)。
IRES: Internal Ribosome Entry Site;mRNA内部的核糖体插入位点。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 质粒DNA制备
通过柱纯化法制备质粒DNA (没有去除内毒素)。
 
■ 质粒大小
  pDON-5 OCT3/4 -SOX2 DNA   7,321 bp
  pDON-5 KLF4 DNA   6,092 bp
  pDON-5 LIN28-NANOG DNA   6,838 bp
 
■ 各载体的遗传信息
  基因名   GenBank Accession No.
  OCT4   NM_002701.4
  SOX2   NM_003106.2
  KLF4   NM_004235.3
  LIN28   NM_024674.4
  NANOG   NM_024865.2
*: 更新的NM_004235.4中,CDS的5’端追加了对应9个氨基酸的碱基。本制品的KLF4基因中不含N端的这9个氨基酸的序列,已经确认可以有效诱导iPS细胞。
 
■ 纯度
1. 含有70%以上的双链Covalently closed circular form I (RF I)。
2. 通过dideoxy法测序确认了载体的部分序列。
3. 经确认下表中的限制酶可以切断质粒。
  质粒名称   限制酶(切断数)
  pDON-5 OCT3/4 -SOX2 DNA   Hpa I(1),Not I(2)
  pDON-5 KLF4 DNA   Hpa I(1),Not I(1)
  pDON-5 LIN28-NANOG DNA   Hpa I(1),Not I(2)
 
■ 质粒载体图谱
 
 

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