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Random Primer DNA Labeling Kit Ver.2
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara 6045 Random Primer DNA Labeling Kit Ver.2 30 次 ¥648
 
■ 制品内容 (30 次量)
Random Primer (9 mer) 60 μl
10 × Buffer 75 μl
dNTP Mixture (dGTP,dATP,dTTP各0.2 mM) 75 μl
Exo-free Klenow Fragment (2 U/μl) 30 μl
Control DNA solution (λ-Hind III digest 25 ng/μl) 10 μl
 
■ 制品说明
本试剂盒利用 [α-32P]或[3H]dCTP标记DNA,制备具有高比活性的杂交用DNA探针。本试剂盒的设计以Feinberg和Vogelstein法为基础加以了改进,利用9个碱基的随机寡聚核苷酸引物以及E. coli DNA Polymerase I 的 Exonuclease-free Klenow Fragment (无3' →5' 外切酶活性) ,在短时间内 (2-3分钟)即能得到比活性为1×109 dpm/μg的探针。它克服了表1中切口平移法的许多缺点。
 
■ 原 理
利用杂交法检定具有特异序列的DNA时,必须使用高比放射活性的DNA探针。Feinberg和Vogelstein发表的随机引物标记法从少量DNA (10-20 ng) 制得的探针具有很高的比活性,并且可以直接在低熔点琼脂糖凝胶中标记DNA片段。原理如图1所示。首先通过热变性使模板DNA变为单链DNA,然后使随机引物与单链DNA退火,再利用Klenow Fragment合成互补链形成标记和未标记的核苷酸。
表1
     切口平移法  随机引物法
反应时间 延长反应时间会降低标记效率。     短时间内即可得到高比活性的探针。即使反应时间延长也不受影响。
探针比活性 108 dpm/μg     109 dpm/μg
模板纯度 琼脂糖等抑制反应     琼脂糖对反应没有影响
反应后纯化 需要除去未反应的dNTP     不需要除去未反应的dNTP
模板量要求 ≥1 μg     ≥25 ng
以上对比数据的依据:以50 μCi的[α-32P]dCTP(370 MBq/ml)标记λ DNA-Hind III,以此为模板进行多重对照实验。
 
图1 Random Primer Labeling原理
 
 
 

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