| Double Digestion(双酶切反应)时Universal Buffer(通用缓冲液)的使用表 |
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| ■ 说明 |
使用二种酶同时进行DNA切断反应的双酶切反应是节省实验操作时间的常用手段之一。Takara采用Universal Buffer表示系统，并对每种酶表示了在各Universal Buffer中的相对活性。尽管如此，在进行Double Digestion时，有时还会难以找到合适的Universal Buffer。
本表以在pUC系列载体的多克隆位点处的各限制酶为核心，显示了Double Digestion可使用的最佳Universal Buffer条件。在本表中，各Universal Buffer之前表示的 [数字×] 是指各Universal Buffer的反应体系中的最终浓度。Takara销售产品中添附的Universal Buffer全为10倍浓度的缓冲液。终浓度为0.5×时反应体系中的缓冲液则稀释至20倍，1×时稀释至10倍，2×时稀释至5倍进行使用。
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| ■ 注意 |
◇ 1 μg DNA中添加10 U的限制酶，在50 μl的反应体系中，37℃下反应1小时可以完全降解DNA。
◇ 为防止Star活性，请将反应体系中的甘油含量尽量控制在10%以下。
◇ 根据DNA的种类，各DNA的高级结构的差别，或当限制酶识别位点邻接时，有时会发生Double Digestion不能顺利进行。 |
| Enzyme |
Acc I |
BamH I |
Bgl II |
Cla I |
EcoR I |
EcoR V |
Hinc II |
Hind III |
Kpn I |
Nco I |
Nde I |
| Acc I |
－ |
0.5×K |
1×T |
1×M |
1×M |
0.5×K |
1×M |
1×M |
1×M |
1×M
+BSA |
1×T |
| BamH I |
0.5×K |
－ |
1×K |
1×K |
1×K |
1×K |
0.5×K |
1×K |
0.5×K |
1×K
+BSA |
1×K |
| Bgl II |
1×T |
1×K |
－ |
1×H |
1×H |
1×H |
2×K |
1×K |
1×T |
1×K
+BSA |
1×H |
| Cla I |
1×M |
1×K |
1×H |
－ |
1×H |
1×H |
1×M |
1×M |
1×M |
1×K
+BSA |
1×H |
| EcoR I |
1×M |
1×K |
1×H |
1×H |
－ |
1×H |
1×M |
1×M |
1×M |
1×K
+BSA |
1×H |
| EcoR V |
0.5×K |
1×K |
1×H |
1×H |
1×H |
－ |
2×T |
1×K |
0.5×K |
1×K
+BSA |
1×H |
| Hinc II |
1×M |
0.5×K |
2×K |
1×M |
1×M |
2×T |
－ |
1×M |
1×M |
1×M
+BSA |
1×T |
| Hind III |
1×M |
1×K |
1×K |
1×M |
1×M |
1×K |
1×M |
－ |
1×M |
1×K
+BSA |
1×K |
| Kpn I |
1×M |
0.5×K |
1×T |
1×M |
1×M |
0.5×K |
1×M |
1×M |
－ |
0.5×K
+BSA |
1×T |
| Nco I |
1×M
+BSA |
1×K
+BSA |
1×K
+BSA |
1×K
+BSA |
1×K
+BSA |
1×K
+BSA |
1×M
+BSA |
1×K
+BSA |
0.5×K
+BSA |
－ |
1×K
+BSA |
| Nde I |
1×T |
1×K |
1×H |
1×H |
1×H |
1×H |
1×T |
1×K |
1×T |
1×K
+BSA |
－ |
| Not I |
0.5×K
+BSA |
0.5×K
+BSA |
1×H
+BSA |
1×H
+BSA |
1×H
+BSA |
1×H
+BSA |
0.5×K
+BSA |
0.5×K
+BSA |
0.5×K
+BSA |
0.5×K
+BSA |
1×H
+BSA |
| Pst I |
1×M |
1×K |
1×H |
1×H |
1×H |
1×H |
1×M |
1×M |
1×M |
1×K
+BSA |
1×H |
| Pvu I |
0.5×K |
1×K |
1×K |
1×K |
1×K |
1×K |
0.5×K |
1×K |
0.5×K |
1×K
+BSA |
1×K |
| Sac I |
1×M |
0.5×K |
0.5×K |
1×M |
1×M |
0.5×K |
1×M |
1×M |
1×L |
0.5×K
+BSA |
1×T |
| Sal I |
1.5×T |
1.5×T |
1×H |
1×H |
1×H |
1×H |
1.5×K |
1.5×K |
1.5×T
+BSA |
1.5×T
+BSA |
1×H |
| Sma I |
1×T
+BSA |
0.5×T
+BSA |
1×T
+BSA |
1×T
+BSA |
1×T
+BSA |
0.5×K
+BSA |
1×T
+BSA |
1×T
+BSA |
1×T
+BSA |
1×T
+BSA |
1×T
+BSA |
| Spe I |
1×M |
1×K |
1×H |
1×M |
1×H |
1×H |
1×M |
1×M |
1×M |
1×K
+BSA |
1×H |
| Sph I |
0.5×K |
1×K |
1×H |
1×H |
1×H |
1×H |
2×T |
1×K |
0.5×K |
1×K
+BSA |
1×H |
| Xba I |
1×M |
0.5×K |
2×T |
1×M |
1×M |
2×T |
1×M |
1×M |
1×M |
1×M
+BSA |
1×T |
| Xho I |
1×M |
1×K |
1×H |
1×H |
1×H |
1×H |
1×M |
1×M |
1×M |
1×K
+BSA |
1×H |
|
| |
| Enzyme |
Not I |
Pst I |
Pvu I |
Sac I |
Sal I |
Sma I |
Spe I |
Sph I |
Xba I |
Xho I |
| Acc I |
0.5×K
+BSA |
1×M |
0.5×K |
1×M |
1.5×T |
1×T
+BSA |
1×M |
0.5×K |
1×M |
1×M |
| BamH I |
0.5×K
+BSA |
1×K |
1×K |
0.5×K |
1.5×T |
0.5×T
+BSA |
1×K |
1×K |
0.5×K |
1×K |
| Bgl II |
1×H
+BSA |
1×H |
1×K |
0.5×K |
1×H |
1×T
+BSA |
1×H |
1×H |
2×T |
1×H |
| Cla I |
1×H
+BSA |
1×H |
1×K |
1×M |
1×H |
1×T
+BSA |
1×M |
1×H |
1×M |
1×H |
| EcoR I |
1×H
+BSA |
1×H |
1×K |
1×M |
1×H |
1×T
+BSA |
1×H |
1×H |
1×M |
1×H |
| EcoR V |
1×H
+BSA |
1×H |
1×K |
0.5×K |
1×H |
0.5×K
+BSA |
1×H |
1×H |
2×T |
1×H |
| Hinc II |
0.5×K
+BSA |
1×M |
0.5×K |
1×M |
1.5×K |
1×T
+BSA |
1×M |
2×T |
1×M |
1×M |
| Hind III |
0.5×K
+BSA |
1×M |
1×K |
1×M |
1.5×K |
1×T
+BSA |
1×M |
1×K |
1×M |
1×M |
| Kpn I |
0.5×K
+BSA |
1×M |
0.5×K |
1×L |
1.5×T
+BSA |
1×T
+BSA |
1×M |
0.5×K |
1×M |
1×M |
| Nco I |
0.5×K
+BSA |
1×K
+BSA |
1×K
+BSA |
0.5×K
+BSA |
1.5×T
+BSA |
1×T
+BSA |
1×K
+BSA |
1×K
+BSA |
1×M
+BSA |
1×K
+BSA |
| Nde I |
1×H
+BSA |
1×H |
1×K |
1×T |
1×H |
1×T
+BSA |
1×H |
1×H |
1×T |
1×H |
| Not I |
－ |
1×H
+BSA |
2×K
+BSA |
0.5×K
+BSA |
1×H
+BSA |
0.5×T
+BSA |
1×H
+BSA |
1×H
+BSA |
0.5×K
+BSA |
1×H
+BSA |
| Pst I |
1×H
+BSA |
－ |
1×K |
1×M |
1×H |
0.5×T
+BSA |
1×H |
1×H |
1×M |
1×H |
| Pvu I |
2×K
+BSA |
1×K |
－ |
0.5×K |
1.5×K
+BSA |
1×K
+BSA |
1×K |
1×K |
0.5×K |
1×K |
| Sac I |
0.5×K
+BSA |
1×M |
0.5×K |
－ |
1.5×T
+BSA |
1×T
+BSA |
1×M |
0.5×K |
1×M |
1×M |
| Sal I |
1×H
+BSA |
1×H |
1.5×K
+BSA |
1.5×T
+BSA |
－ |
1.5×T
+BSA |
1×H |
1×H |
1.5×T
|
1×H |
| Sma I |
0.5×T
+BSA |
0.5×T
+BSA |
1×K
+BSA |
1×T
+BSA |
1.5×T
+BSA |
－ |
1×T
+BSA |
0.5×T
+BSA |
1×T
+BSA |
1×T
+BSA |
| Spe I |
1×H
+BSA |
1×H |
1×K |
1×M |
1×H |
1×T
+BSA |
－ |
1×H |
1×M |
1×H |
| Sph I |
1×H
+BSA |
1×H |
1×K |
0.5×K |
1×H |
0.5×T
+BSA |
1×H |
－ |
2×T |
1×H |
| Xba I |
0.5×K
+BSA |
1×M |
0.5×K |
1×M |
1.5×T |
1×T
+BSA |
1×M |
2×T |
－ |
1×M |
| Xho I |
1×H
+BSA |
1×H |
1×K |
1×M |
1×H |
1×T
+BSA |
1×H |
1×H |
1×M |
－ |
|
| |
| |
京公网安备 110114000405号