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产品选择指南

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Capturem™ Extracellular Vesicle Isolation Kit
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 635741 Capturem Extracellular Vesicle Isolation Kit (Mini) 20 Minipreps ¥6,671
¥5,337
Clontech 635748 Capturem Extracellular Vesicle Isolation Kit (Maxi) 8 Maxipreps ¥9,181
¥7,345

*红字为促销价格,促销时间: 2021年9月1日-2021年10月31日

 
■ 产品概述
本制品是基于Capturem新型膜技术的一次性使用离心柱,可在30 min内实现血浆等多种生物体液样品中细胞外囊泡(EVs)的简单快速提取。其基本原理是根据EVs的生化性质,选择与其特异性结合的凝集素(非抗体)固定于Capturem™膜上,进而对EVs进行提取,产物纯度高、污染少。
 
■ 产品特点
· 适用范围广— 可应用于全血、血浆、血清、唾液、尿液、脑脊液、母乳、细胞培养上清液等多种生物体液样品中的EVs提取
· 快速、重复性好- 30 min内即可从最高850 μl(Mini)或24 ml(Maxi)生物体液样品中快速提取EVs,不同操作者也可获得具有重复性的EVs收量
· 收量高— EVs最高收量可达1010(Mini)或1011(Maxi),可获得足够的exosomal RNA应用于下游的RT-qPCR、 NGS等研究
· 纯度高— 提取的EVs经Western Blot检测表达exosome蛋白质,而不表达nonexosomal污染蛋白质,如calnexin和 albumin
· 完整性好- 基于凝集素的提取原理,EVs不易被破坏,TEM下观察呈经典形态
· 简单易用— 试剂盒组分配备齐全,包含一次性的预清洁柱,一次性的离心柱,以及平衡、洗涤和洗脱缓冲液,且经过优化,操作简便
 
■ 操作流程
注:1. *过滤步骤使用100-kDa MWCO的过滤装置,过滤时间取决于样品的类型和体积。
    2. 本制品最大载样量约为1010 EVs/column(Mini)或1011 EVs/column(Maxi),多次上样收量也不会超过最大值。
 
■ 实验例
 
实验例 1

 
与超速离心法相比,本制品分离得到的EVs浓度和纯度更高。分别使用本制品和超速离心法从500 μl血浆样品中分离EVs,进行三次重复性实验,使用Nanoparticle tracking analysis (NTA) 检测。每种方法的粒径分布计算以平均值(黑线)和标准误差(红线)显示。结果显示,本制品提取的EVs平均粒径大小为81 nm(D90=110 nm),超速离心法提取的EVs平均粒径大小为135 nm(D90=203 nm)。上图可见,使用本制品提取的EVs具有更窄的粒径分布范围,且稳定性更好。
 
实验例 2
 
使用本制品成功地从不同生物体液样品中提取EVs。上图NTA结果显示,本制品可以应用于多种生物体液样品的EVs提取,如母乳、唾液、脑脊液、血清、尿液、条件培养基。每种方法的粒径分布计算以平均值(黑线)和标准误差(红线)显示。
 
实验例 3
对使用本制品与超速离心法提取的EVs中的目的蛋白质进行Western blot分析。结果显示,与超速离心法相比,本制品提取的EVs包含更多的exosome特异性标记物CD63、CD9和Alix,而non-exosome蛋白质(calnexin和albumin)含量较少。因此,本制品提取的EVs纯度更高、污染蛋白质更少。
 
实验例 4
与超速离心法相比,使用本制品提取的EVs,可获得更高的RNA收量。使用Capturem EV kit(Mini)从50 μl血浆中提取的EVs可以获得约100 pg/μl的RNA,而使用超速离心法,至少需要300 μl血浆才能获得同样收量的RNA。而使用Capturem EV kit(Maxi)从大量样本中提取的EVs,也可以获得稳定的RNA收量。
 
实验例 5
使用本制品提取的EVs,可获得足够的RNA用于下游RT-qPCR实验。本实验例是对Capturem分离的EVs进一步提取RNA再进行miRNA筛选。 首先使用PrimeScript RT Master Mix(Perfect Real Time)将RNA反转录为cDNA,然后使用Takara PreAmp Master Mix进行预扩增。应用SmartChip Real Time PCR系统对所得cDNA库进行1,200个miRNA靶标筛选,结果检测到108个miRNA,对表达量前8的miRNA进行了芯片外验证,结果显示miR-548w,miR-496,miR-744-3p,miR-660-3,miR-3167和miR-376A-3p在分离的EVs样品中拷贝数最高,其中很多microRNA已被验证过在血浆来源的EVs中表达量较高。本实验例表明,Capturem分离的EVs包含足够的RNA可用于下游的RT-qPCR实验。
 
实验例 6
使用本制品提取的EVs,可获得足够的RNA用于下游NGS实验。以本制品提取的EVs中的RNA为样本,使用SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v2 - Pico Input Mammalian进行NGS建库。Bioanalyzer trace表明构建了良好且统一的文库,后续的测序表明,构建得到的NGS文库基因覆盖度良好。
 
 
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