| DNA甲基化 (methylation) 检测 | ||||||||||||||||
| ★ Takara独特的引物设计，可以特异的检测目标区域 | ||||||||||||||||
| ★ 检测试剂系统化(从硫化试剂至克隆，采用Takara独有试剂，保证检测结果高可信度) | ||||||||||||||||
| ■ DNA甲基化简介 | ||||||||||||||||
| DNA甲基化修饰现象广泛存在于多种有机体中，是表观遗传学 (Epigenetics) 的重要组成部分。大量研究表明，DNA甲基化能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变，从而在基因的表达及其调控、DNA的复制、细胞的生长、X染色体失活、衰老以及许多人类疾病 (如发育畸形、癌症、心血管疾病、糖尿病和神经心理失调等) 发生过程中发挥重要作用。 |
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| ■ CpG岛简介 | ||||||||||||||||
| DNA的甲基化主要形成5-甲基胞嘧啶和少量的N6-甲基腺嘌呤及7-甲基鸟嘌呤。在高等生物中，5-甲基胞嘧啶多发于CpG二核苷酸序列中，基因组中60%-90%的CpG是甲基化的。在甲基转移酶 (CpG Methyltransferase, M.SssI) 的作用下，利用S-腺苷甲硫氨酸提供的甲基，使CpG二核苷酸序列中的胞嘧啶转变为5-甲基胞嘧啶。由于甲基化胞嘧啶极易在进化中丢失，高等真核生物中CpG序列远远低于其理论值，但在基因组的某些区域中，可以达均值的5倍以上，成为鸟嘌呤和胞嘧啶的富集区，形成所谓的CpG岛。通常是基因的启动子和第一外显子区，CpG序列密度很高。哺乳类基因组中约存在4万个CpG岛，大多位于转录单元的5' 端。 |
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| DNA甲基化检测的主要应用 | ||||||||||||||||
| ◇ 肿瘤的早期预测、分类分级、预后评估及多种疾病的分析 ◇ 转录水平分析：位于启动子区域的甲基化一般会抑制转录 ◇ 细胞凋亡等调控机制的研究 |
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| ■ 服务内容 | ||||||||||||||||
| ◇ 亚硫酸氢盐修饰后测序法 (bisulfite sequencing PCR, BSP) 该方法是首先使用亚硫酸氢盐修饰基因组DNA，所有未发生甲基化的胞嘧啶都被转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶则保持不变。之后设计引物进行PCR扩增，产物克隆测序，定量分析每个CpG位点甲基化情况。 该方法优点：可靠性及精确度高，能明确目的片段中每一个CpG位点的甲基化状态。是目前新甲基化位点的寻找和DNA甲基化检测的最可靠方法之一。 ◇ 甲基化特异性的PCR法 (methylation-specific PCR，MSP) 该方法是在甲基化区域设计甲基化特异性的引物 (M Primer) 和非甲基化特异性的引物 (U Primer)，使用M Primer和U Primer分别进行PCR扩增，检测此MSP扩增产物，如果使用M Primer能扩增出片段，则说明该被检测的位点存在甲基化；若用U Primer扩增出片段，则说明被检测的位点不存在甲基化。 该方法特点：是一种简便的、特异的、敏感的检测单CpG位点甲基化的方法。可以用于高通量样品DNA特异位点甲基化的检测。 ◇ 高通量测序解析 该方法是利用磁珠方法，从整个基因组中分级富集低度、中度、高度甲基化DNA片段，经物理方法片段化后，采用Illumina Genome Analyzer GA II (Illumina公司) 高速序列解析仪进行序列解析，通过延伸反应所发生的4色荧光，一次性得到最大约12 Gb的碱基序列。 该方法特点：是基因组整体水平的甲基化检测，能明确基因组中甲基化状态，是寻找新甲基化位点的最可靠方法之一，但实验费用较贵。 |
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| ■ 服务说明 | ||||||||||||||||
| 1. 基因信息 (请提供详细的序列或NCBI登录号)。我们会根据您提供的基因序列信息和选择的检测方法，进行甲基化检测。 2. 样品要求： |
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4. 由于材料的个体差异，我们不保证获得的甲基化分布与您预期相同，以样品实际结果为准。 |
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| ■ 本公司服务优势 | ||||||||||||||||
| ◇ 硫化过程转变效率高 亚硫酸修饰过程中的硫化转变效率，是决定甲基化检测是否可信的重要指标，因此本公司采用高质量的试剂基础上，BSP检测时选择10个质粒的测序结果进行分析。如果发现硫化不完全，我们的专家会为您重新调整方案再免费进行一次亚硫酸修饰和BSP操作。 ◇ 独特的引物设计 几乎所有的实验者都使用软件在线进行引物的设计，而我们凭借丰富的实践经验，可同时使用多种手段进行引物的设计和检验，完成各种不同难度的实验。 ◇ 甲基化扩增区域长 Takara采用高品质试剂，曾多次有效地扩增400～600 bp的甲基化产物 (一般公司扩增长度是 300～400 bp)。 ◇ 甲基化克隆阳性率高 基因组DNA经亚硫酸氢盐修饰后与常规的基因序列不同，若使用普通克隆载体，将无法保证克隆时基因是否会被选择性克隆。我们使用本公司针对甲基化克隆而研发的载体，会提高阳性克隆率，并保证甲基化克隆无偏差。 ◇ 多种检测方法 因实验目的不同，可供选择的检测方法也不同，Takara提供的检测方法如下：  Takara推荐：根据目前中国市场情况，DNA甲基化检测和寻找新甲基化位点，首选 BSP服务。 |
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| ■ 价格·实验周期 | ||||||||||||||||
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| ■ 收费标准 | ||||||||||||||||
| 我们根据您的基因情况和委托项目，与您确认好实验方案后，会给出合理的实验报价，请垂询。 | ||||||||||||||||
| ■ 提供结果 | ||||||||||||||||
| 电子版数据 (包括PDF版实验报告、质粒测序结果等)。 | ||||||||||||||||
| 如果您需要进行此项服务，请填写“Takara DNA甲基化 (methylation) 检测服务委托书”(请与本公司联系索取)。填写后通过传真或E-mail发送给我们或当地代理商。 | ||||||||||||||||
页面更新：2015-01-15 11:29:07
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