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DNA侧翼未知序列获取

★ 高效、简便、特异性高,适合于任何物种
★ 一次性获得的未知序列较长,并且可以根据一次获取序列的结果进一步进行侧翼序列获取
获得与已知序列相邻的未知序列的染色体步移技术 (Genome walking) 即侧翼序列获取,是一项重要的分子生物学研究技术。侧翼序列获取主要有以下几方面的应用:
1) 根据已知的基因或分子标记连续步移获取人、动物和植物的重要调控基因,用于研究结构基因的表达调控;
2) 步查获得新物种中基因的非保守区域,从而获得完整的基因序列;
3) 鉴定T-DNA或转座子的插入位点以及鉴定基因枪转基因法等转基因技术所导致的外源基因的插入位点;
4) 用于染色体测序工作中的空隙填补,从而获得完整的基因组序列;
5) 用于人工染色体PAC、YAC和BAC的片段搭接。
对于基因组测序已经完成的少数物种 (如人、小鼠、线虫、水稻、拟南芥等) 来说,可以轻松地从数据库中找到已知序列的侧翼序列。但对于自然界中种类繁多的其它生物而言,在不知道它们的基因组DNA序列以前,想要知道一个已知区域两侧的DNA序列,只能采用染色体步移技术,进行侧翼序列获取。
我们使用Genome Walking Kit (Code No.: 6108) 为客户进行技术服务。这种方法具有高效、简便、特异性高、一次性获得的未知序列较长等其它传统方法不可比拟的特点。如果一次获取长度不够,还可以根据一次获取序列的结果再设计特异性引物,继续进行侧翼序列获取。此方法具有物种通用性,从简单的λ噬菌体、细菌到高等的植物、动物、人都适用。
 
■ 服务内容
◇ 已知序列的验证
根据客户提供的已知序列设计引物,以材料的基因组DNA为模板进行PCR扩增,以验证已知序列是否在模板中存在。
◇ 5' 或3' 未知序列的获取
根据已知序列设计3条高退火温度的特异性下游或上游引物,同时使用试剂盒中低退火温度的简并引物AP1、AP2、AP3、AP4中的一种,利用特异性引物与简并引物之间退火温度的差异进行热不对称PCR,通过三次巢式PCR获取侧翼序列。
◇ 对获取的序列进行验证
获取侧翼未知序列后,我们将分别在已知和未知序列上设计引物进行PCR 扩增,以电泳检测方式验证获取的序列与已知序列是连续存在的。
 
■ 服务说明
1. 我们目前接收的样品形式为与参考序列物种一致的材料或上述材料的基因组DNA。
1) 实验材料必须保证新鲜,请您采样后立即放入液氮中速冻或加入样品稳定剂 (如Sample Protector for RNA/DNA〈Code No.: 9750〉)。
2) 基因组DNA要求完整、纯度高、无RNA污染,总量≥3 μg。如果基因丰度较低或调取的基因较长,请您提供尽量多的材料。
2. 实验结束后,我们将对扩增出的未知序列部分进行PCR验证,并对PCR产物进行测序。如果扩增出来的未知序列与您提供的已知序列在样品的基因组上连续存在,即判断实验成功,本公司将收取全额实验费用。至于扩增出的未知序列是否与该材料的基因组数据库匹配,将不作为判断实验成功与否的标准。
3. 若PCR产物测序产生套峰,我们将采取克隆测序的方法,其准确性由客户自行判断。
 
■ 价格·实验周期
具体实验费用及周期请垂询。
 
■ 提供结果
电子版结果 (包括PDF版实验报告、测序彩色波形图、碱基序列等) 等。
 
如果您需要进行此项服务,请填写“Takara DNA侧翼未知序列获取服务委托书”(或请与本公司联系索取)。填写后通过传真或E-mail发送给我们或当地代理商。