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基因组DNA解析—Fosmid文库构建

Fosmid 载体是现在流行的用于替代 Cosmid 载体构建大片段文库的新载体,与BAC文库构建相比,Fosmid文库的构建更简单,快速。其优点如下:
1. 由于插入了大肠杆菌致育因子F-因子,所以它在宿主菌中以单拷贝形式存在,稳定性好。
2. Fosmid载体上有一个可诱导的oriV高拷贝复制起始点,需要时可诱导达到高拷贝 (50个左右) 。
3. 随机性好,保证了每段DNA在文库中出现的频率均等。
近年来,Fosmid文库已被广泛应用于基因的图位克隆、物理图谱的构建和比较基因组研究中。
 
■ Fosmid文库的构建
◇ Fosmid文库质量标准
文库的滴度≥104,阳性克隆平均插入片段长度为35 kb左右。
◇ Fosmid文库构建的方法
1. 提取基因组DNA。
2. 将基因组DNA用物理的方法进行切断处理,然后对DNA片段进行末端平滑磷酸化处理。
3. 进行脉冲电泳,回收38 kb-48 kb之间的DNA片段。
4. 将回收后的DNA片段连接到特定的载体上。
5. 将连接液进行包装,转染。
6. 通过一系列实验确认文库质量。
7. 根据客户需要可以进行Fosmid DNA末端测序,也可以进行文库甘油菌保存。
◇ 对客户提供样品的要求
1. 基因组DNA:要求完整,纯度高,无RNA污染,总量大于50 μg。
2. 动、植物组织:要提供新鲜且单一的组织20 g,如果组织含油脂很多,组织提供量还需要再多些 (注:如果油脂过多,DNA收量少)。
3. 菌体:要求提供培养后立即收集,并经过液氮或低温速冻处理的菌体10 g以上。
◇ Fosmid文库相关报价
NO. 操作类型 费 用
1   基因组DNA提取 询价
2   Fosmid文库构建 (提供文库包装液) 询价
3   Fosmid文库单克隆 (96 well) 甘油菌保存 询价
4   Fosmid文库 clone pool (96 well) 甘油菌保存 询价
5   Fosmid单板 (96 well) DNA提取及琼脂糖凝胶电泳 询价
6   Fosmid单板 (96 well) DNA两个末端测序 询价
合计费用:客户要求公司进行的所有作业类型费用之和为合计费用。
如果您需要进行此项服务,请填写文库构建服务委托书”。填写后通过传真或E-mail发送给我们或当地代理商。