| 基因组DNA解析—Fosmid文库构建 | ||||||||||||||||||||||
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| Fosmid 载体是现在流行的用于替代 Cosmid 载体构建大片段文库的新载体，与BAC文库构建相比，Fosmid文库的构建更简单，快速。其优点如下: 1. 由于插入了大肠杆菌致育因子F-因子，所以它在宿主菌中以单拷贝形式存在，稳定性好。 2. Fosmid载体上有一个可诱导的oriV高拷贝复制起始点，需要时可诱导达到高拷贝 (50个左右) 。 3. 随机性好，保证了每段DNA在文库中出现的频率均等。 近年来，Fosmid文库已被广泛应用于基因的图位克隆、物理图谱的构建和比较基因组研究中。 | ||||||||||||||||||||||
| ■ Fosmid文库的构建 | ||||||||||||||||||||||
| ◇ Fosmid文库质量标准 | ||||||||||||||||||||||
| 文库的滴度≥104，阳性克隆平均插入片段长度为35 kb左右。 | ||||||||||||||||||||||
| ◇ Fosmid文库构建的方法 | ||||||||||||||||||||||
| 1. 提取基因组DNA。 2. 将基因组DNA用物理的方法进行切断处理，然后对DNA片段进行末端平滑磷酸化处理。 3. 进行脉冲电泳，回收38 kb-48 kb之间的DNA片段。 4. 将回收后的DNA片段连接到特定的载体上。 5. 将连接液进行包装，转染。 6. 通过一系列实验确认文库质量。 7. 根据客户需要可以进行Fosmid DNA末端测序，也可以进行文库甘油菌保存。 | ||||||||||||||||||||||
| ◇ 对客户提供样品的要求 | ||||||||||||||||||||||
| 1. 基因组DNA：要求完整，纯度高，无RNA污染，总量大于50 μg。 2. 动、植物组织：要提供新鲜且单一的组织20 g，如果组织含油脂很多，组织提供量还需要再多些 (注：如果油脂过多，DNA收量少)。 3. 菌体：要求提供培养后立即收集，并经过液氮或低温速冻处理的菌体10 g以上。 | ||||||||||||||||||||||
| ◇ Fosmid文库相关报价 | ||||||||||||||||||||||
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| 合计费用：客户要求公司进行的所有作业类型费用之和为合计费用。 | ||||||||||||||||||||||
| 如果您需要进行此项服务，请填写“文库构建服务委托书”。填写后通过传真或E-mail发送给我们或当地代理商。 |
页面更新：2017-04-14 09:42:12
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