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CycleavePCR Salmonella Detection Kit Ver.2.0
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara CY205 CycleavePCR Salmonella Detection Kit Ver.2.0 50 Rxns ¥2,003
无标题文档
 
■ 制品内容 (25 μl × 50次量)
2X Cycleave Reaction Mixture (2X conc.)
625 μl
SIN Primer/Probe Mix (FAM、ROX标记) (5X conc.)*
250 μl
dH2O 1 ml
SIN Positive Control
150 μl (30次反应量)
   
* 含荧光标记探针,应避光保存。引物由SHIMADZU CORPORATION生产制造。
 
Limited Use Label License:[M46]
 
■ 制品说明
沙门氏菌 (Salmonella) 是与E.CoilShigella同属于一群的重要肠道致病菌,这一类细菌在自然界中分布很广,其中有2,500多种被确认为血清型。近年来由于Salmonella Enteritidis引起的食物中毒急剧增加。
本制品是对大部分沙门氏菌都具有的基因-侵袭蛋白A (invasion protein A,invA) 基因进行快速、准确检出的Real Time PCR试剂盒。在PCR反应中每个循环包括三个过程:模板变性、引物退火、聚合酶作用下的延伸,该反应可以实现目的基因的指数倍扩增,使用Real Time PCR可实时监测扩增过程。 制品中使用了改良后的Hot Start法用DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS,可防止在循环反应前因引物错配、引物二聚体所产生的非特异性扩增。
该检测使用了Cycling Probe法。Cycling Probe法是由RNA和DNA构成的杂合探针与RNase H组合使用的高灵敏度检出法,能够高效率地检出扩增过程中及扩增结束时的目的基因片段。Cycling Probe内部含有RNA碱基,一端标记荧光物质,另一端标记荧光淬灭物质,当探针处于完整状态时,由于荧光淬灭作用抑制荧光物质发出荧光,但当探针与扩增产物中的互补序列杂交后,RNase H在RNA部分将探针切断,淬灭抑制作用解除,荧光物质发出荧光,通过测定荧光强度,能够实时监控扩增产物量。
制品中检测沙门氏菌invA基因的探针荧光物质使用了FAM标记,内参照检测用探针的荧光物质使用了ROX标记,在同一反应管内对沙门氏菌invA基因及内参照 (Internal Control) 同时进行扩增,通过两种不同荧光标记探针可以对invA基因和内参基因同时检定,实现双通道同步检测。其中,对内参照反应的检测,可以监控反应是否正常进行,防止假阴性结果的产生。本检测无需电泳,简单快速,灵敏度高、特异性强。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 注意事项
1. Real Time PCR仪的使用请按照说明书进行。
2. 如果杂合探针、引物因混入核酸酶而被降解,则不能准确进行检测。实验者的汗液和唾液也会带入核酸酶,操作时应注意。
3. PCR反应是灵敏度非常高的反应。为防止污染,建议从反应液的配制到检测的实验过程中,设定以下3个实验区域,并进行物理性隔离。
  区域1:反应液的配制及分装。
区域2:检测样品的制备。
区域3:向反应液中添加检测样品,进行反应、检出。
由于本制品使用Real Time PCR法,扩增反应与检测同时进行,反应后的扩增产物不需要再进行电泳。为了避免污染,严禁从Tube管中取出扩增产物。
4. 使用本制品获得的结果是以Real Time PCR仪的分析为基础来判定的。如果Real Time PCR仪的任一功能出现问题都可能导致错误的判定结果,因此,要依据仪器说明书来正确设置Real Time PCR仪。