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■ 制品内容 (50 μl反应×40次) |
2X Gflex PCR Buffer (Mg2+,dNTP plus) |
1 ml |
Tks Gflex™ DNA Polymerase (1.25 U/μl) |
40 μl |
L.mono HA1 Primer (20 μM) |
60 μl |
L.mono HA2 Primer (20 μM) |
60 μl |
L.mono MonoA Primer (20 μM) |
100 μl |
L.mono LisB Primer (20 μM) |
100 μl |
L.mono Positive Control (2×104 copies/μl)*1 |
75 μl |
RNase Free dH2O |
1 ml |
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*1 L.mono Positive Control仅作为反应性能监测的对照,浓度仅供参考。实验时请用阳性标本提取的DNA作为阳性对照。
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【各种引物序列】 |
引物名称 |
引物序列 |
扩增片段大小 |
L.mono HA1 Primer |
5′- GCAGTTGCAAGCGCTTGGAGTGAA -3′ |
456 bp |
L.mono HA2 Primer |
5′- GCAACGTATCCTCCAGAGTGATCG -3′ |
L.mono MonoA Primer |
5′- CAAACTGCTAACACAGCTACT -3′ |
702 bp |
L.mono LisB Primer |
5′- TTATACGCGACCGAAGCCAA -3′ |
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L.mono HA1 Primer/L.mono HA2 Primer扩增溶血素基因;L.mono MonoA Primer/L.mono LisB Primer
扩增P60蛋白的编码基因。
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■ 制品说明 |
李斯特氏菌是革兰氏阳性的、有鞭毛、无芽孢的短杆菌 (0.4~0.5×0.5~2.0 μm)。在分类学上属于李斯特氏菌属,这个属共有8种菌。其中只有Listeria monocytogenes菌是引起人李斯特氏菌症的病原菌。能引起发热、头痛的同时会引发髓膜炎、败血症、心内膜炎、肺炎等多发性病症。1980年以来作为集体食物中毒的病原菌 (即食物中毒病原菌) 引起人们注意。
本试剂盒是根据中华人民共和国出入境检验检疫行业标准《SN/T 0184.2-2006 食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测方法 第2部分:多重PCR方法》开发的用于检测Listeria monocytogenes的multiplex PCR试剂盒。Tks Gflex DNA Polymerase是在Thermococcus 属古细菌由来的DNA Polymerase的基础上进行改良的PCR聚合酶,该酶能够有效抑制酶与模板DNA的非特异性结合。并具有α型酶特有的高保真性和优良的扩增性。同时体系中添加了Takara特别研发的延伸因子和提高引物特异性的物质,可以实现在很宽的模板浓度范围内进行高速、特异性强的PCR扩增。对于普通PCR酶难扩增 (含有PCR阻害物) 的GC Rich、AT Rich的目的基因均可进行有效扩增。另外其中还添加了能够吸附PCR阻害物的成份和扩增增强因子,对于粗提品也能进行高效的PCR扩增。
本酶添加了在常温下能够抑制DNA Polymerase活性及3’→5’exonuclease活性的抗体,是Hot Start型DNA聚合酶。本检测简单快速,灵敏度高,特异性强。 |
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■ 注意事项 |
1. 根据中华人民共和国出入境检验检疫行业标准《SN/T 0184.2-2006 食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测方法 第2部分:多重PCR方法》,使用本试剂盒方法判断为阳性的样品,建议再选用其他方法,如:API、生化鉴定和协同溶血 (cAMP) 试验等,进行进一步确认。
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2. PCR反应是灵敏度非常高的反应。为防止污染,建议从反应液的配制到检测的实验过程中,设定以下3个实验区域,并进行物理性隔离。 |
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区域1:反应液的配制及分装。此时不要开闭装有扩增产物或检测样品的Tube管。 |
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区域2:检测样品的制备。此时不要开闭装有扩增产物或检测样品的Tube管。 |
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区域3:向反应液中添加检测样品,进行反应、检出。 |
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