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产品选择指南

技术服务信息

pAUR135 DNA
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara 3604 pAUR135 DNA 20 μg ¥2,003
 
□ 浓度  
     0.5 μg/μl  
□ 贮存溶液  
     Tris-HCl (pH 8.0) 10 mM
     EDTA 1 mM
   
 
■ 制品说明
pAUR135 DNA是一种穿梭载体,可以利用载体本身的DNA序列将酿酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae) 转化子中的载体部分序列包括选择标记AUR1-C基因去除。选择标记被去除的克隆筛选更容易且高效。所以,pAUR135载体可以反复转化。含有AUR1-C基因的载体在酵母细胞中具有Aureobasidin A (AbA)抗性和GAL10启动子调控的GIN11M86 DNA。GIN11M86基因的过表达可以抑制宿主细胞的生长。大部分因为pAUR135存在而具有AbA抗性的转化子在转移到半乳糖培养基中培养时,GIN11M86基因可以在GAL10启动子和半乳糖作用下过表达,从而表现出致死显型。但是只有那些低效重组获得的pAUR135载体被去除的克隆可以优先在半乳糖培养基中生长。这些能在含有半乳糖的培养基中生长的克隆是包含目的表型的克隆和回复原状的克隆,是AbA敏感的克隆。所以pAUR135可以对这些克隆再次转化。pAUR135能够有效地在酵母中导入突变和破坏基因功能。假如工业酵母菌株发生了退变,应用pAUR135可以减少不必要DNA序列引起的麻烦。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 链长
6,074 bp
 
■ 制备
CsCl-EtBr 超离心方法制备。
 
■ 注意

1. 在pAUR135中进行选择标记去除主要依靠GIN11M86的过表达,而GIN11M86的过表达受半乳糖诱导的GAL10启动子控制。

因此,有效的标记去除需要宿主菌对半乳糖的消化作用,实验前要事先确认宿主的半乳糖营养性后再使用本系统。
2. 对于标记去除的克隆,目的表型的比例受导入突变或缺失的位置的影响很大。

 
pAUR135载体图谱
 
 

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