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AAVpro® Purification Kit (All Serotypes)
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara 6666 AAVpro® Purification Kit Maxi(All Serotypes) 4 preps ¥6,134
Takara 6675 AAVpro® Purification Kit Midi (All Serotypes) 4 preps ¥2,630
无标题文档
 
 
AAV表达载体 AAV包装系统 293T包装细胞 AAV提取 AAV浓缩 AAV纯化 AAV滴度测定
 
 
■ 制品内容
  Code No. 6666 Code No. 6675
AAV Extraction Solution A plus 22 ml × 2 4.4 ml × 2
AAV Extraction Solution B 4.5 ml 0.9 ml
Precipitator A* 5 ml 1 ml
Precipitator B 2.5 ml 0.5 ml
Millex-HV 0.45 μm 4 4
Amicon Ultra-15或-4, 100 kDa 4 4
Suspension Buffer 60 ml × 2 12 ml×2
Cryonase Cold-active Nuclease 500 μl 100 μl
*:Precipitator A 低温保存时会产生白色沉淀物,不影响制品的品质和性能。产生沉淀时,37℃水浴中加热使其完全溶解后再使用。
 
Limited Use Label License: [M88]
 
■ 制品说明
腺相关病毒载体(AAV载体)能够将基因导入至增殖细胞和非增殖细胞中,尤其在非分裂细胞中可以实现长期表达。此外,由于它具有低免疫原性,适用于动物个体基因导入。当使用AAV载体进行动物个体基因导入时,使用高纯度的病毒粒子是很有必要的,需要去除源自病毒包装细胞和培养基的杂质。将基因导入至培养细胞时,使用纯化后的AAV粒子可以消除杂质所带来的影响。
AAV粒子的纯化通常使用CsCl密度梯度超速离心法或碘克沙醇超速离心法,但这两种方法不仅需要熟练的操作手法,同时还存在耗时长和回收率低等问题。
AAVpro Purification Kit (All Serotypes)可以在大约4个小时内简便有效地从AAV粒子制备细胞中纯化出AAV粒子,适用于各种血清型(Serotype)。该试剂盒使用了特别的AAV粒子提取方法,省去了冻融和超声破碎等繁琐操作;特别的AAV载体纯化方法,通过简单的操作即可有效去除杂质。AAVpro Purification Kit Maxi(All Serotypes)用于从5个T225培养瓶的包装细胞中纯化AAV粒子,AAVpro Purification Kit Midi(All Serotypes)用于从1个T225培养瓶的包装细胞中纯化AAV粒子,两个试剂盒所包含的缓冲液和浓缩柱均为4次纯化用量。
 
随着AAVpro Purification Kit Midi(All Serotypes)(Code No. 6675)的发布,我们变更了原AAVpro Purification Kit(All Serotypes)(Code No. 6666)的产品名称。从批次Lot No. AK21409A和Lot No. AK21411A开始,Code No. 6666的产品名称将由AAVpro Purification Kit(All Serotypes)更改为AAVpro Purification Kit Maxi(All Serotypes)。除了产品名称之外,该试剂盒的性能、组分、价格、包装量、操作步骤等都没有发生变更。
 
■ 保存
Cryonase Cold-active Nuclease:-20℃
其他组份:室温
 
■ 特点
· 适用于各种AAV血清型。
· 高纯度、高回收率。
· 特别的AAV载体提取方法,省去了冻融和超声破碎等繁琐操作。
· 特别的AAV载体纯化方法,通过简单的操作即可有效去除杂质。
· 无需进行超离心等繁琐操作。
· 附带从病毒包装细胞中纯化AAV粒子所必需的所有试剂。
 
■ 实验操作流程图
使用AAVpro Purification Kit (All Serotypes) 纯化AAV粒子的操作概略图
 
■ 实验例
图1. 使用AAVpro Purification Kit Maxi (All Serotypes)纯化不同血清型AAV粒子,测定其纯度。制备携带绿色荧光蛋白质ZsGreen1的不同血清型AAV病毒粒子,每种血清型病毒粒子均以5个T225培养瓶培养的包装细胞进行制备。使用该试剂盒分别进行纯化,之后使用AAVpro Titration Kit (for Real Time PCR) Ver.2(Code No. 6233)测定病毒滴度,并以1×109 vector genomes/泳道进行SDS-PAGE。SDS-PAGE结果显示,对于本次检测的所有血清型病毒粒子,观察到的主要条带均为AAV衣壳蛋白质(VP1,VP2和VP3)。
 
图2. 使用AAVpro Purification Kit Maxi (All Serotypes) 纯化不同血清型AAV粒子,评估其感染能力。不同血清型AAV粒子纯化后,感染不同细胞类型,评估其感染性。将纯化后携带绿色荧光蛋白质ZsGreen1的AAV粒子,以5,000 vector genomes/细胞(1、2、3、6型血清型)或50,000 vector genomes/细胞(5型血清型)分别感染CHO、RD、HT1080细胞,感染3天后使用流式细胞仪进行分析。结果表明,使用该试剂盒纯化的AAV粒子能够成功感染本次测试的细胞类型。
 
 

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