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Lenti X T-Cell Transduction Sponge是一种无需借助仪器在T细胞中实现微流体驱动的慢病毒高效转导的新技术。在一块海绵中，融入了经过优化的T细胞活化试剂（重组人白介素2rhIL-2和抗人CD3/CD28抗体）混合物，能够一步完成2×106-107个T细胞的活化和转导，而不需要耗时的spinoculation操作或者条件严苛、需要优化以保持细胞活力的化学转导增强剂。
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| Lenti X T-Cell Transduction Sponge的工作原理是什么？ |
将靶标细胞（T细胞或PBMCs）和慢病毒混合后，添加到T细胞转导海绵中，37℃孵育1小时，以使混合物被充分吸收。吸收完全后，加入细胞培养基，37℃孵育48小时。
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孵育完成后，加入专用的释放缓冲液浸泡海绵，转导后的细胞就可以轻松从海绵中释放出来。在随后的洗涤步骤中，完成转导的海绵会被溶解，而这不会对细胞活力造成影响。这些细胞可以扩大培养或者用于下游研究应用。整个操作过程更大限度地减少了对细胞的处理过程，降低了对病毒的需求量，总反应体积也更小，展现了对用户非常高的友好度。使用T细胞转导海绵，可以获得与传统方法相当或优于传统方法的转导效率，并且更容易获得高度一致的实验结果，实验稳定性和重复性高。
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| ■ 特点 |
· 一步同时完成T细胞活化和转导
· 无需使用仪器，实现微流体驱动的慢病毒高效转导
· 一块海绵对应24孔板的一个孔，可转导2×106-107个细胞
· 可不再依赖需要专业离心设备耗时耗力的spinoculation操作
· 可不再依赖对细胞可能有毒性作用并且需要优化以保持细胞活力的化学增强剂（如polybrene）
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| ■ 应用 |
☆ 以下应用方向的慢病毒转导实验：
· T细胞工程化改造
· 基因编辑
· 基因表达
· 蛋白质表达
· 细胞系构建
· 疾病治疗建模
· 全基因组筛选
· 利用慢病毒进行基因改造的CAR-T研究
☆ 逆转录病毒和病毒样颗粒(VLPs)的转导
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| ■ 实验例 |
1. Lenti-X T-Cell Transduction Sponge外观和微观结构。
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Lenti-X T-Cell Transduction Sponge外观和微观结构。Panel A. 12片海绵包装在耐压的泡罩包装中，150倍放大视野可以观察到大孔径的海藻酸盐孔隙结构，孔径范围在20-300 μm之间。Panel B. 图解说明如何通过海绵结构促进T细胞和病毒的共定位。
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2. 不同MOI情况下高效活化人原代T细胞
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在不同MOI情况下能够高效活化T细胞。将表达绿色荧光蛋白ZsGreen1的慢病毒以不同感染复数（MOI=0，5，10，Average）和4×106人原代T细胞进行混合，分别添加至Lenti-X T-cell Transduction Sponge（" T-cell sponge "）进行活化，同时也使用CD3/CD28 Immunocult T细胞激活剂（"Conjugate"）活化T细胞作为平行比较。未经激活处理的细胞作为阴性对照（"Unstim"）。48小时后，通过流式细胞荧光分选技术（FACS）分析检测活化T细胞中CD69的表达情况。
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3. 不同MOI情况下高效转导人原代T细胞。
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不同MOI情况下高效转导人原代T细胞。将表达绿色荧光蛋白ZsGreen1的慢病毒以不同感染复数（MOI=0，5，10）和4×106人原代T细胞进行混合，分别添加至Lenti-X T-cell Transduction Sponge（" T-cell sponge "）进行转导。Spinoculated样品使用CD3/CD28 Immunocult T细胞激活剂活化2天，之后添加polybrene (8 μg/ml)作为转导增强剂同时1,500 g离心90分钟促进慢病毒转导（"Spinoculation"）。通过流式细胞荧光分选技术（FACS）分析指定时间点绿色荧光蛋白（GFP）ZsGreen1的表达情况来评估转导效率。图中显示的百分比是转导七天时GFP+的表达情况。
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4. 转导后人原代T细胞依然保持高细胞活力。
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转导后人原代T细胞依然保持高细胞活力。将表达绿色荧光蛋白ZsGreen1的慢病毒以不同感染复数（MOI=0，5，10）和4×106人原代T细胞进行混合，分别添加至Lenti-X T-cell Transduction Sponge（" T-cell sponge "）进行转导。Spinoculated样品使用CD3/CD28 Immunocult T细胞激活剂活化2天，之后添加polybrene (8 μg/ml)作为转导增强剂同时1,500 g离心90分钟促进慢病毒转导（"Spinoculation"）。转导后通过7-AAD染色法和流式细胞荧光分选技术（FACS）在指定时间点对细胞活力进行分析。
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