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可溶性微流体慢病毒转导增强剂
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 631478 Lenti-X Transduction Sponge 24 Rxns ¥6,169
无标题文档
 
慢病毒包装系统 293T包装细胞 慢病毒滴度测定 慢病毒浓缩 慢病毒纯化 转导增强 整合位点检测
 
Lenti-X Transduction Sponge是一项可以在不使用微流体仪器的情况下实现微流体驱动的慢病毒转导效率的新技术。一块海绵可以转导105-107个细胞,而不需要进行耗时的spinoculation操作,或者使用为了保持细胞活力需要进行优化的化学转导增强剂。Lenti-X Transduction Sponge能够高效转导广泛细胞类型,包括常见细胞系和难转导的原代细胞。
 
Lenti-X Transduction Sponge是一种微流体海绵,由钙离子交联的海藻酸盐制成,这是一种符合GMP标准、FDA批准的生物材料,具有高生物相容性和低毒性的特点。交联的海藻酸盐经过温和的冷冻凝胶化过程,形成孔径均匀、大小在20-30 μm的海绵。这种大孔藻酸盐结构,可以促进快速有效的慢病毒转导,而不需要spinoculation操作或使用化学转导增强剂。 它能够促进靶细胞和慢病毒的共定位,消除常用慢病毒转导方法所带来的的生物转运问题。简单易用的操作流程减少了对细胞的处理,需要的总反应体系更小,产生的转导效率与传统方法相当或优于传统方法。
 
Lenti-X Transduction Sponge是如何工作的呢?
将靶细胞和慢病毒混合后添加至海绵上,37℃孵育1小时,使混合物被海绵吸收进去。吸收后,向含有海绵的孔中加入细胞培养基,37℃孵育16-24小时。
 
次日,将海绵放在一种特定的释放缓冲液中进行溶解,该缓冲液可解聚海藻酸盐基质,从而可轻松释放出健康的转导细胞。这些细胞可以被重新接种用于继续培养和下游应用。整个操作过程用户友好度高,更大限度地减少了对细胞的处理,总反应体系更小,减少了所需要使用的病毒用量。Lenti-X Transduction Sponge转导效率一致性高,其转导效率与传统方法相当或者优于传统方法。
 
 
概述/特点
这是一个更好的标准慢病毒转导方法的替代方案。
· 在不需要使用基于微流体仪器的情况下,实现微流体驱动的慢病毒转导效率的提高
· 跳过额外需要离心设备的劳动密集型、耗时的spinoculation操作
· 一个海绵可以在24孔板的一个孔中转导105-107个细胞
· 简便易用的操作流程适用于多种细胞类型(包括常规细胞系和原代细胞)
· 终结对化学增强剂(如polybrene)的依赖,这些增强剂对某些细胞类型有毒性作用并且需要在转导期间和转导后进行优化以保持细胞活力
 
应用
用于以下应用的慢病毒转导:
· 基因表达
· 蛋白质表达
· 细胞系构建
· 疾病治疗建模
· 全基因组筛选
· 利用慢病毒进行基因修饰的CAR-T研究
逆转录病毒和病毒样颗粒(VLPs)的转导
 
TECH NOTE
Lentiviral transduction sponge—efficient transduction with an easier workflow
 
实验例
1. 方便的适用于24孔组织培养板的形式。
Lenti-X Transduction Sponge使用方便,可与24孔组织培养板搭配使用。图A. 每个试剂盒包含24个独立海绵,每个海绵能够促进多达1x107个细胞的转导。图B. 每个海绵具有复杂的微流体孔隙结构,孔径范围在20-300 μm。所示图像是150倍放大。图C. 在加入样品之前,简单地将转导海绵放入孔中。图D. 将由1×105-1×107细胞和病毒组成的转导混合物加入至海绵中,孵育1小时后,加入培养基,再孵育16-24小时。图E. 将海绵转移到15 ml锥形管中并加入释放缓冲液,然后进行简短的洗涤步骤,促进细胞释放出来。
 
2. 与spinoculation 转导方法相当的转导效率
Lenti-X Transduction Sponge在多种细胞类型中促成与spinoculation相当的转导水平。图A. 使用ZsGreen1慢病毒以图中标明的感染复数(MOIs)转导1×106个Jurkat细胞,分别通过spinoculation和Lenti-X Transduction Sponge进行转导。Spinoculation培养物在8 μg/ml polybrene存在情况下,以1400xg 32℃离心90 min。转导48小时后通过FACS分析ZsGreen1的表达确认转导效率。图B. 为了进一步比较海绵转导与Spinoculation (图中的“Spin”),使用ZsGreen1慢病毒以不同MOIs转导了多种细胞类型,操作与图A所述相同。
 
3. 保持细胞活力的同时提高T细胞转导效率。
Lenti-X Transduction Sponge在保持细胞活力的同时,有效提高原代T细胞转导效率。图A. 使用MHC四聚体、抗CD3/CD28包被磁珠、Retronectin试剂(RN)+CD3或者仅CD3活化人原代T细胞。上图显示了CD69+表达百分比指示的48小时的活化水平。然后,使用转导海绵以特定感染复数(MOI)转导ZsGreen1慢病毒至1×106个活化细胞,转导24小时。在转导后48小时进行FACS分析确定%ZsGreen1。图B. 通过7-AAD染色和FACS分析测定转导后48小时的细胞存活率。
 
4. 不同细胞量和不同转导时间情况下表现出一致的转导效率,不同海绵间的变异性低。
Lenti-X Transduction Sponge在不同的细胞数量和转导时间的情况下表现出一致的转导效率,不同海绵间的变异性低。图A. 使用ZsGreen1慢病毒,以特定感染复数(MOIs) 去转导一定数量的Jurkat细胞,分别使用RetroNectin试剂+ spinoculation (RN + spin)操作流程或者转导海绵转导24小时。图B. 使用ZsGreen1慢病毒,通过转导海绵转导不同数量的Jurkat细胞4、9、24或48小时(MOI=10)。图C. 使用ZsGreen1慢病毒(MOI=2.5)转导1×106个Jurkat细胞,每周重复6次,持续4周,以评估板间变异性(%CV=12.6)。在所有实验中,ZsGreen1的表达是在转导48小时后使用流式细胞仪检测确定ZsGreen阳性细胞的百分比和平均荧光强度(MFI)来分析确定的。ZsGreen1在所有重复中的平均表达量用红色表示(AVG)。
 
 
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页面更新:2024-05-14 14:51:44