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产品选择指南

技术服务信息

SARS-CoV-2假病毒宿主细胞
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 631289 Human ACE2 293T Cell Line 1 ml ¥27,106
 
SARS-CoV-2进入宿主细胞是由刺突蛋白与ACE2受体之间的相互作用所介导的。为了助力病毒与受体相互作用研究和COVID-19疗法开发,我们开发了在CMV启动子控制下稳定表达ACE2的HEK细胞。已证实,经过多次传代该细胞依然可持续高水平表达ACE2,并可被使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制备的SARS-CoV-2假病毒高效转导。
 
ACE2是一种含锌金属酶,位于内皮细胞和其他类型细胞的表面。这种跨膜蛋白可将血管紧张素I转化为血管紧张素1-9(一种在心肌细胞中起抗肥厚作用的9-氨基酸肽),并将血管紧张素II转化为血管紧张素1-7,这是一种有益的血管扩张剂和防扩散剂。
 
Human ACE2 293T Cell Line由编码ACE2的慢病毒转导HEK细胞构建而成。通过RT-qPCR方法证实,该细胞经亚克隆能高效表达ACE2。
 
■ 概述
· 由CMV启动子控制,组成型表达ACE2的HEK细胞
· 经多次传代证实,ACE2可持续高效表达
· 可被SARS-CoV-2假病毒
(e.g., 使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制备)高效转导
 
■ 应用
· SARS-CoV-2假病毒中和研究
· 病毒-受体相互作用和病毒侵入分析
 
■ 实验例
 
图1 通过流式细胞术分析ACE2表达情况。使用与Alexa Fluor 488共轭抗ACE2抗体(R&D Systems, Code No. FAB9332G)检测表达在人ACE2 293T细胞表面的ACE2,未被标记的细胞作为阴性对照。
 
图2 不同代次细胞中ACE2稳定表达的情况。使用One Step PrimeScript RT-PCR Kit (Perfect Real Time) (Code No. RR064A)通过RT-qPCR方法,测定人ACE2 293T连续细胞代次中ACE2 mRNA相对表达水平。以三个重复测定的管家基因ACTB Ct值为标准对ACE2表达的Ct值进行归一化处理。通过计算2^(-ΔΔCt),确定相对于293T细胞,稳转细胞中ACE2的表达情况。
 
图3 使用表达ZsGreen1绿色荧光蛋白质的SARS-CoV-2假病毒转导人ACE2 293T细胞。使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制备携带野生型或者D614G变异型刺突蛋白(截短形式)并表达ZsGreen1绿色荧光蛋白质的慢病毒粒子。Panel A为感染72小时后被转导细胞的显微图像。Panel B为在转导6天后,通过流式细胞仪测定的每个样品的转导效率。
 
图4 使用表达荧光素酶的SARS-CoV-2假病毒转导人ACE2 293T细胞。使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制备携带野生型或者D614G变异型刺突蛋白(全长或者截短形式)并表达萤火虫荧光素酶的慢病毒粒子。取10 μl 浓缩病毒液(21倍)转导人ACE2 293T细胞。转导6天后测定荧光素酶活性,以不表达包膜蛋白的病毒作为对照,测定荧光素酶活性背景值。
 
图5 使用人ACE2 293T细胞进行中和试验,以非人灵长类动物恢复期混合血清作为阻断剂。野生型(截短形式)SARS-CoV-2假病毒与梯度稀释的恢复期血清(BEI Resources,Code. NR-52401)孵育后转导人ACE2 293T细胞。感染3天后测定荧光素酶水平,作为病毒感染读数。图示数据为中和作用相对于仅病毒控制感染的百分比。数值为平均值±标准偏差,实验设置3个平行重复。阴性对照组添加健康猕猴血清作为阻断剂。
 
图6 使用人ACE2 293T细胞进行中和试验,以可溶性ACE2蛋白作为阻断剂。Panels A和B梯度稀释与IgG (ACE2-Fc)Fc结构域相融合的可溶性ACE2蛋白,和SARS-CoV-2假病毒一起转导人ACE2 293T细胞。图示数据为中和作用相对于仅病毒控制感染的百分比。数值为平均值±标准偏差,实验设置3个平行重复。
 
 
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